新的红细胞分化相关基因EDRF1增强HEL细胞的珠蛋白表达

R3; 目的观察EDRF1基因在HEL细胞中对红细胞终末分化和珠蛋白表达的扮演的角色.方法构建EDRF1真核正义和反义表达载体,转染HEL细胞并筛选稳定表达细胞克隆.然后利用Northern blot和反转录PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)的方法观察红系标志基因的表达水平改变.凝胶阻滞电泳(electrophoresis mobility shift assay, EMSA)的方法观察红系转录因子的DNA结合活性的改变.结果与对照相比,EDRF1过表达的HEL细胞中α-珠蛋白合成明显增加,EDRF1反义表...

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Published in中华医学杂志(英文版) Vol. 115; no. 11; pp. 1701 - 1705
Main Authors 王敦成, 黎燕, 沈倍奋
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850 2002
Subjects
gene expression regulation
红细胞分化
珠蛋白
基因表达调控
globin
electrophoresis mobility shift assay
凝胶阻滞电泳
转录因子
erythroid differentiation
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ISSN0366-6999
DOI10.3760/j.issn:0366-6999.2002.11.023

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Summary:R3; 目的观察EDRF1基因在HEL细胞中对红细胞终末分化和珠蛋白表达的扮演的角色.方法构建EDRF1真核正义和反义表达载体,转染HEL细胞并筛选稳定表达细胞克隆.然后利用Northern blot和反转录PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)的方法观察红系标志基因的表达水平改变.凝胶阻滞电泳(electrophoresis mobility shift assay, EMSA)的方法观察红系转录因子的DNA结合活性的改变.结果与对照相比,EDRF1过表达的HEL细胞中α-珠蛋白合成明显增加,EDRF1反义表达载体转染的HEL细胞中的α、γ-珠蛋白合成下调,而红细胞生成素受体(erythropoietin receptor, ER)表达水平没有明显改变,这提示EDRF1并非通过调控ER信号通路而影响HEL细胞的红细胞分化.红细胞特异的转录因子GATA-1和NF-E2 mRNA的表达在转染前后没有明显改变.另外,GATA-1转录因子的DNA结合活性在反义表达载体转染的HEL细胞中受到明显的抑制,而NF-E2的转录活性则没有明显的改变.结论 EDRF1下调珠蛋白的合成是通过抑制红系特异的转录因子GATA-1的DNA结合活性实现的.
ISSN:0366-6999
DOI:10.3760/j.issn:0366-6999.2002.11.023