HSA转基因水稻二重微滴数字PCR定量检测方法研究

Q78%S511; 重组人血清白蛋白(HSA,Human serum albumin)基因工程水稻是我国自主研发的可规模化生产水稻重组人血清白蛋白(OsrHSA)的转基因品系,具有极高的推广价值和应用前景,但是目前缺乏对其进行精准定量检测的方法.微滴数字PCR(ddPCR,droplet digital PCR)是近年来新兴的前沿PCR技术,不依赖标准物质即可实现对DNA分子的绝对定量,在转基因产品定量领域被广泛应用.本研究基于ddPCR平台建立了适用于重组人血清白蛋白基因工程水稻(114-7-2品系)的二重ddPCR精准定量检测方法.通过对引物探针的特异性进行验证、对引物探针工作浓度和反应退...

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Published in中国油料作物学报 Vol. 44; no. 5; pp. 1098 - 1107
Main Authors 李晓飞, 姚晓青, 闫晓红, 李俊, 朱莉, 吴刚, 罗军玲
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 中国农业科学院油料作物研究所/农业农村部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北武汉,430062 2022
Subjects
微滴数字PCR
绝对定量
水稻重组人血清白蛋白(OsrHSA)
转基因
基因工程水稻
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ISSN1007-9084
DOI10.19802/j.issn.1007-9084.2021247

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Summary:Q78%S511; 重组人血清白蛋白(HSA,Human serum albumin)基因工程水稻是我国自主研发的可规模化生产水稻重组人血清白蛋白(OsrHSA)的转基因品系,具有极高的推广价值和应用前景,但是目前缺乏对其进行精准定量检测的方法.微滴数字PCR(ddPCR,droplet digital PCR)是近年来新兴的前沿PCR技术,不依赖标准物质即可实现对DNA分子的绝对定量,在转基因产品定量领域被广泛应用.本研究基于ddPCR平台建立了适用于重组人血清白蛋白基因工程水稻(114-7-2品系)的二重ddPCR精准定量检测方法.通过对引物探针的特异性进行验证、对引物探针工作浓度和反应退火温度进行优化,获得最佳反应条件.进而对该方法检测限、定量限和结果重复性做了测定.最后通过对不同含量的重组人血清白蛋白转基因水稻样品进行定量检测,分析比较传统实时荧光定量PCR(quanti?tative real-time PCR,qRT-PCR)和二重ddPCR的优劣,结果表明本研究建立的转基因水稻HSA/PLD二重ddPCR方法稳定性更好、灵敏度高、成本低廉,精准可靠,适用于不依赖标准物质的精准定量HSA转基因水稻转化体含量分析,可取代qRT-PCR方法进行HSA转基因水稻的绝对定量检测,完善了我国转基因水稻成分精确定量检测技术体系.
ISSN:1007-9084
DOI:10.19802/j.issn.1007-9084.2021247