粉尘螨变应原Der f 36重组蛋白制备及其与Der p 36的交叉反应性研究

• Published in: 中国免疫学杂志 Vol. 40; no. 8; pp. 1744 - 1754
• Main Authors: 任雅宁, 廖媛芬, 周冬梅, 崔玉宝, 顾晓虹, 周鹰, 张健
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心,无锡 214023%江南大学附属儿童医院,无锡 214001 2024
• Subjects: 生物信息学; Der f 36; Immunogenicity; Der p 36; Bioinformatics; 免疫原性
• ISSN: 1000-484X
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2024.08.027

R384.4; 目的:制备粉尘螨变应原第36组分(Der f 36)重组蛋白,鉴定其免疫原性并进行生物信息学分析.方法:获得Der f 36核酸序列并进行人工合成,插入pET-28a(+)载体,制备pET-28a(+)-Der f 36质粒,转化至BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达和纯化后,获得重组变应原rDer f 36,SDS-PAGE和Western blot鉴定rDer f 36重组蛋白,IgE-ELISA检测其血清IgE结合率,IgE-ELISA抑制实验检测rDer f 36与rDer p 36的交叉反应性;HNEpC细胞与rDer f 36共孵育24 h后测定细胞因子;生物信息学软件比较Der f 36与Der p 36的理化性质和结构.结果:得到了Der f 36的编码基因,全长690 bp,相对分子质量为25.6 kD;IgE-ELISA鉴定rDer f 36血清IgE结合率为 42.1%;IgE-ELISA抑制实验结果显示rDer p 36对rDer f 36的抑制率>50.00%[40.00%(8/20)],平均抑制率为52.98%.HNEpC细胞与rDer f 36共孵育后,IL-6、IL-8、IL-33、IL-25和TSLP表达均高于对照组.生物信息学分析显示Der f 36和Der p 36的序列一致性为77.63%,理化性质较为相似;二级结构分析结果显示二者均含有α螺旋、β转角和无规则卷曲,且无规则卷曲含量最高;C2结构域显示高度重叠(RMSD=0.046).结论:成功制备了rDer f 36重组蛋白,且具有免疫原性,为粉尘螨变应原单组分诊断及治疗奠定了基础.Der f 36与Der p 36的理化性质、二级结构和三级结构高度相似,决定其具有交叉反应性.