hsa-miRNA-223-3p调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用
R459.9%R394.3%Q756; 背景:研究发现miR-223-3p在骨质疏松患者体内高表达,但其相关机制研究甚少.目的:探讨hsa-miR-223-3p对骨髓间充质干细胞成骨分化的调节作用.方法:Percoll密度梯度离心法分离、培养骨髓间充质干细胞,诱导其成骨分化,然后过表达hsa-miR-223-3p,RT-qPCR和Western blot方法检测Wnt信号通路标志物Wnt5a及其下游信号分子OPG、RUNX2的mRNA和蛋白水平变化.构建pmirGLO/Wnt5a-3'UTR和pmirGLO/Wnt5a-3'UTR mut质粒,分别与hsa-miR-223-...
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Published in | 中国组织工程研究 Vol. 25; no. 7; pp. 1008 - 1013 |
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Main Authors | , , , , |
Format | Journal Article |
Language | Chinese |
Published |
西南医科大学,四川省泸州市 646000
2021
航空工业三六三医院,四川省成都市 610000 成飞医院,四川省成都市 610000%成飞医院,四川省成都市 610000%川北医学院第二临床医学院·南充市中心医院组织工程与干细胞研究所,四川省南充市 637000%西南医科大学,四川省泸州市 646000 |
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ISSN | 2095-4344 |
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Summary: | R459.9%R394.3%Q756; 背景:研究发现miR-223-3p在骨质疏松患者体内高表达,但其相关机制研究甚少.目的:探讨hsa-miR-223-3p对骨髓间充质干细胞成骨分化的调节作用.方法:Percoll密度梯度离心法分离、培养骨髓间充质干细胞,诱导其成骨分化,然后过表达hsa-miR-223-3p,RT-qPCR和Western blot方法检测Wnt信号通路标志物Wnt5a及其下游信号分子OPG、RUNX2的mRNA和蛋白水平变化.构建pmirGLO/Wnt5a-3'UTR和pmirGLO/Wnt5a-3'UTR mut质粒,分别与hsa-miR-223-3p mimics/对照质粒共转染至293T细胞,双荧光素酶报告基因系统验证hsa-miR-223-3p与Wnt5a的靶定关系.结果与结论:①随着成骨诱导时间的延长,细胞培养液中碱性磷酸酶水平逐渐增加,茜素红染色可见暗红色或红褐色钙盐结节沉积逐渐增加;②过表达hsa-miR-223-3p后,细胞中Wnt5a、OPG、RUNX2的mRNA和蛋白水平降低;③hsa-miR-223-3p直接靶定Wnt5a的3'UTR区,降低Wnt5a的荧光素酶活性;突变掉Wnt5a的结合位点,靶定作用消失.封闭hsa-miR-223-3p后,野生型Wnt5a的荧光素酶活性增加,突变型Wnt5a的荧光素酶活性不变;④结果表明,在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中,过表达hsa-miR-223-3p可以影响Wnt信号通路标志物Wnt5a及其下游信号分子OPG、RUNX2的表达.hsa-miR-223-3p可直接与Wnt5a结合,Wnt5a作为hsa-miR-223-3p的下游靶基因,受其负向调控. |
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ISSN: | 2095-4344 |