氧化苦参碱下调ZNF580以抑制LTC-14细胞分泌细胞外基质的分子机制研究

• Published in: 天津医药 Vol. 47; no. 4; pp. 376 - 381
• Main Authors: 陈凯, 张青, 刘百庆, 陈伟, 周芳, 张兰, 夏时海, 许威
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 中国人民武装警察部队特色医学中心,天津市肝脏胰腺纤维化与分子诊疗重点实验室,300162%天津市西青医院 2019
• Subjects: ZNF580; 细胞外基质; 氧化苦参碱; 胰腺星状细胞; 转化生长因子β1
• ISSN: 0253-9896
• DOI: 10.11958/20181630

R576; 目的 探讨氧化苦参碱(OM)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠胰腺星状细胞LTC-14中细胞外基质(ECM)分泌的影响及其分子机制.方法 取生长良好的LTC-14细胞株,分为对照组(正常培养的LTC-14细胞),TGF-β1组(10μg/L TGF-β1刺激12 h),TGF-β1+OM组(1 g/L OM预处理30 min,再加入10μg/L TGF-β1刺激12 h),TGF-β1+SiZNF850组(LTC-14细胞中瞬时转染ShRNA-ZNF580质粒,24 h后加入10μg/L TGF-β1刺激12 h).实时定量PCR、Western blot检测细胞内Smad2、Smad3、ZNF580、α-肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)的mRNA和蛋白表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测ECM中胶原蛋白-Ⅰ(Col-Ⅰ)、Col-Ⅲ、纤维连接蛋白(FN)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的分泌情况.结果 TGF-β1诱导的LTC-14细胞中Smad2、Smad3、ZNF580和 α-SMA的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05),MMP-2/TIMP1比值下降(P<0.05),且Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN、TNF-α 和IL-1β 的分泌水平升高(P<0.05);而用OM预处理或沉默ZNF580基因后,LTC-14细胞中TGF-β1/Smads通路Smad2、Smad3、α-SMA和ZNF580的mRNA和蛋白表达水平均下调(P<0.05),MMP-2/TIMP1表达比值升高(P<0.05),细胞外基质Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN、TNF-α和IL-1β分泌水平均降低(P<0.05).结论 OM通过抑制胰腺星状细胞LTC-14中TGF-β1/Smads通路激活,下调ZNF580,阻滞胰腺星状细胞的活化,使ECM分泌减少、降解增多,减轻胰腺纤维化.ZNF580可能是OM作用的分子靶点.