FOXO3a调控线粒体自噬在肝脏缺血再灌注损伤中的作用

R657.3%R394.64; 目的 探讨转录因子FOXO3a调控线粒体自噬对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为Sham组(只模拟开腹手术不夹闭)和再灌注(IR)2、6、12、24 h组,每组6只,建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型.血生化检测各组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化,HE染色及TUNEL法观察肝组织损伤及细胞凋亡情况,Western blot及qRT-PCR检测各组细胞中转录因子FOXO3a、线粒体自噬相关蛋白Nix蛋白及其mRNA表达水平.培养小鼠肝AML12细胞,用FOXO3a和Nix干扰RNA处理细胞建立缺氧1.5 h复...

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Published in天津医药 Vol. 45; no. 12; pp. 1242 - 前插1
Main Authors 宋虎, 张建军, 王振, 杜晨阳, 郑虹, 沈中阳
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 天津医科大学一中心临床学院 300192%天津市第一中心医院器官移植中心 2017
Subjects
ischemia-reperfusion injury
mitophagy
缺血再灌注损伤
apoptosis
FOXO3a
凋亡
线粒体自噬
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ISSN0253-9896
DOI10.11958/20170865

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Summary:R657.3%R394.64; 目的 探讨转录因子FOXO3a调控线粒体自噬对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为Sham组(只模拟开腹手术不夹闭)和再灌注(IR)2、6、12、24 h组,每组6只,建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型.血生化检测各组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化,HE染色及TUNEL法观察肝组织损伤及细胞凋亡情况,Western blot及qRT-PCR检测各组细胞中转录因子FOXO3a、线粒体自噬相关蛋白Nix蛋白及其mRNA表达水平.培养小鼠肝AML12细胞,用FOXO3a和Nix干扰RNA处理细胞建立缺氧1.5 h复氧6 h的模型,分为siRNA-NC组(加入10μL siRNA空载对照转染细胞)、FOXO3a siRNA组(加入10μL FOXO3a siRNA转染细胞)以及Nix siRNA组(加入10μL Nix siRNA转染细胞).MTT法检测各组细胞活力,共聚焦显微镜观察各组细胞内自噬体的数量与分布,Western blot检测FOXO3a、Nix、微管相关蛋白LC3、凋亡蛋白P62及Caspase-3的表达情况.结果 IR各组ALT、AST均明显升高,且再灌注6 h时达到峰值(P<0.05).HE及TUNEL结果示再灌注6 h时小鼠肝组织损伤以及细胞凋亡最严重.IR各组FOXO3a及Nix的mRNA相对表达量均高于Sham组,且再灌注12 h时FOXO3a的mRNA表达量最高,再灌注6 h时Nix的mRNA表达量最高(P<0.05).Western blot示再灌注12 h时FOXO3a相对表达水平最高,再灌注6 h时Nix、Caspase-3、LC3Ⅱ相对表达水平最高.干扰FOXO3a的表达后,MTT显示FOXO3a siRNA组细胞存活率降低(P<0.05);Western blot检测显示siRNA-NC组FOXO3a表达水平高于FOXO3a siRNA组,Nix、Caspase-3、LC3Ⅱ表达水平明显低于FOXO3a siRNA组(P<0.05).共聚焦显微镜观察示siRNA-NC组细胞内自噬体的数量低于FOXO3a siRNA组.干扰Nix的表达后,MTT显示Nix siRNA组细胞存活率升高(P<0.05);Western blot检测显示siRNA-NC组Nix、P62、LC3Ⅱ表达水平高于Nix siRN
ISSN:0253-9896
DOI:10.11958/20170865