基于环介导等温扩增技术快速检测疣孢褐盘菌

目的 基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立一种常见的有毒蘑菇(疣孢褐盘菌Peziza badia)的快速检测方法.方法 使用疣孢褐盘菌的内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)作为目的基因设计特异性的LAMP引物,使用可视化法和实时荧光法分别对LAMP扩增结果进行判断,可视化法通过颜色即可判断结果,实时荧光法观察是否有扩增曲线,两种技术相互验证.结果 本研究设计的引物特异性强,与其他阴性样品无交叉反应,可视化法和实时荧光法的检测结果一致.本方法的检出限为0.8 ng/μL;将...

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Published in食品安全质量检测学报 Vol. 13; no. 20; pp. 6503 - 6510
Main Authors 高洁, 王楠, 张娟, 赵睿明, 温爽, 谢瑞彬, 檀建新, 陈爱亮
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所, 北京 100089%河北农业大学食品科技学院, 保定 071000 2022
Subjects
环介导等温扩增
有毒蘑菇
内部转录间隔区
快速检测
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ISSN2095-0381

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Summary:目的 基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立一种常见的有毒蘑菇(疣孢褐盘菌Peziza badia)的快速检测方法.方法 使用疣孢褐盘菌的内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)作为目的基因设计特异性的LAMP引物,使用可视化法和实时荧光法分别对LAMP扩增结果进行判断,可视化法通过颜色即可判断结果,实时荧光法观察是否有扩增曲线,两种技术相互验证.结果 本研究设计的引物特异性强,与其他阴性样品无交叉反应,可视化法和实时荧光法的检测结果一致.本方法的检出限为0.8 ng/μL;将阴性和阳性样品按比例混合,并经过水煮和人工胃液消化后提取DNA,依然能检测到含量为1％的阳性样品.结论 本方法对仪器要求低,检测速度快,操作和判断结果简单,有利于方法的传播,可用于疣孢褐盘菌的快速检测.
ISSN:2095-0381