传染性胃肠炎病毒(TGEV)双启动子真核表达载体pVAXD-N/S的构建与鉴定

• Published in: 农业生物技术学报 Vol. 20; no. 10; pp. 1207 - 1214
• Main Authors: 黄小波, 邓飞, 曹三杰, 文心田, 杨恒, 李春松, 张鑫淼, 张亮
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 昆明理工大学生命科学与技术学院,昆明650224 2012; 四川省动物疫病预防控制中心%四川农业大学动物医学院,动物传染病与基因芯片实验室/动物疫病与人类健康四川省重点实验室,雅安625014; 四川农业大学动物医学院,动物传染病与基因芯片实验室/动物疫病与人类健康四川省重点实验室,雅安625014%四川农业大学动物医学院,动物传染病与基因芯片实验室/动物疫病与人类健康四川省重点实验室,雅安625014
• Subjects: 双启动子真核表达载体; S基因; 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV); N基因
• ISSN: 1674-7968
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.10.014

猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的高度接触性传染病.TGEV的S、N基因具有重要的免疫学功能,构建S、N双基因疫苗将能提供更好的免疫效果.本研究用RT-PCR扩增S基因抗原区(2.1 kb,含A、B、C和D完整的抗原位点)和N基因编码区(1.2 kb),分别定向插入双启动子真核表达载体pVAXD的多克隆位点(MCS),构建了单价质粒pVAXD-N和pVAXD-S,然后将N基因插入pVAXD-S中,构建了双启动子真核表达质粒pVAXD-N/S.将pVAXD-N/S与对照组(pVAXD-N、pVAXD-S和pVAXD)转染COS-7细胞进行表达鉴定,用RT-PCR可从pVAXD-N/S转染细胞中扩增出s、N两个目的基因,IFA鉴定结果显示,pvAXD-N/S可同时表达S、N两种目的蛋白.初步的小鼠(Mus musculus)免疫试验结果显示,pVAXD-N/S免疫小鼠后第14天即可检测到抗TGEV的IgG抗体,第35天抗体达最高峰,pVAXD-N/S诱导的抗体水平显著高于单基因质粒组pVAXD-N和pVAXD-S的抗体水平(P＞0.5),与混合质粒(pVAXD-N+pVAXD-S)诱导的抗体水平相当.本研究结果表明,构建的双启动子表达载体pV AXD-N/S具有S、N基因的双重免疫功能,为TGEV新型双基因疫苗研究提供了基础材料.