膀胱癌分子标志物基质金属蛋白酶1的可溶性表达和尿液中的活性分析

通过分离人胚胎肾细胞(HEK293)中基质金属蛋白酶1(MMPl)基因序列,利用基因工程技术在大肠杆菌中表达并纯化了包涵体复性的MMP1;采用融合表达硫氧还蛋白(Thioredoxin,TrxA)的方法获得了可溶性的MMPl-TrxA复合蛋白,在TrxA蛋白和MMP1活性中心之间引入了一个肠激酶切割位点,通过酶切作用获得可溶性MMP1.明胶酶谱分析法对体外表达的MMP1和体内(尿液中)MMP1进行了分析比较.结果表明,TrxA蛋白能够显著提高MMP1的可溶性,且可溶性MMP1的明胶降解活性是复性的MMP1降解活性的1.54倍,与尿液中的MMP1的明胶酶降解活性相当.因此,明胶酶谱法是一种有效的...

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Published in分析化学 Vol. 43; no. 4; pp. 582 - 587
Main Authors 晋学飞, 孔祥波, 张丹, 刘婷婷, 王凯臣
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 吉林大学中日联谊医院泌尿外科,长春,130023%吉林大学中日联谊医院内分泌科,长春,130023%吉林省军队离退休干部疗养中心,长春,130061 2015
Subjects
Probe screen
Gelatin zymography
膀胱癌生物标志物
分子探针筛选
基质金属蛋白酶
明胶酶谱
Matrix metalloproteinase
Bladder cancer biomarker
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ISSN0253-3820
DOI10.11895/j.issn.0253-3820.140706

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Summary:通过分离人胚胎肾细胞(HEK293)中基质金属蛋白酶1(MMPl)基因序列,利用基因工程技术在大肠杆菌中表达并纯化了包涵体复性的MMP1;采用融合表达硫氧还蛋白(Thioredoxin,TrxA)的方法获得了可溶性的MMPl-TrxA复合蛋白,在TrxA蛋白和MMP1活性中心之间引入了一个肠激酶切割位点,通过酶切作用获得可溶性MMP1.明胶酶谱分析法对体外表达的MMP1和体内(尿液中)MMP1进行了分析比较.结果表明,TrxA蛋白能够显著提高MMP1的可溶性,且可溶性MMP1的明胶降解活性是复性的MMP1降解活性的1.54倍,与尿液中的MMP1的明胶酶降解活性相当.因此,明胶酶谱法是一种有效的、高灵敏的MMP1检测方法,所表达的可溶性MMP1为小分子探针筛选提供了更可靠的分子靶点.
ISSN:0253-3820
DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.140706