GH/tPA双转基因小鼠的制备及其表达分析

目的 旨在获得GH/tPA双转基因小鼠,并比较分析小鼠乳腺中人组织纤溶酶原激活剂(tPA)的表达水平和个体生长发育状况.方法 利用2只tPA单转基因雄性小鼠(P03、P05)与经超数排卵处理的正常非转基因雌性小鼠交配,受精卵显微注射线性化的GH质粒、胚胎移植而获得后代小鼠,PCR检测基因整合情况,ELISA和Western blotting检测比较单、双基因表达tPA水平,监测转基因小鼠不同生长阶段的体质量来分析GH基因对小鼠生长发育的影响.结果 P03系小鼠共获得286枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔77只,经PCR检测获得16只tPA单转基因小鼠(7♂,9♀),13只GH/tPA双转基因...

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Published in南方医科大学学报 Vol. 41; no. 11; pp. 1649 - 1656
Main Authors 宋绍征, 李丹, 何正义, 张婷, 成勇, 周鸣鸣
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 无锡太湖学院健康与护理学院基础医学系,江苏 无锡 214000%赣南医学院第一附属医院临床医学研究中心,江西 赣州 341000%扬州大学兽医学院//江苏省转基因动物制药工程研究中心,江苏 扬州 225009 2021
Subjects
双转基因小鼠;表达;超数排卵;显微注射;整合
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ISSN1673-4254
DOI10.12122/j.issn.1673-4254.2021.11.08

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Summary:目的 旨在获得GH/tPA双转基因小鼠,并比较分析小鼠乳腺中人组织纤溶酶原激活剂(tPA)的表达水平和个体生长发育状况.方法 利用2只tPA单转基因雄性小鼠(P03、P05)与经超数排卵处理的正常非转基因雌性小鼠交配,受精卵显微注射线性化的GH质粒、胚胎移植而获得后代小鼠,PCR检测基因整合情况,ELISA和Western blotting检测比较单、双基因表达tPA水平,监测转基因小鼠不同生长阶段的体质量来分析GH基因对小鼠生长发育的影响.结果 P03系小鼠共获得286枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔77只,经PCR检测获得16只tPA单转基因小鼠(7♂,9♀),13只GH/tPA双转基因小鼠(8♂,5♀),双基因整合率为16.9％;P05系小鼠共获得175枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔34只,经PCR检测获得12只tPA单转基因小鼠(5♂,7♀),7只GH/tPA双转基因小鼠(3♂,4♀),双基因整合率为20.6％.单、双转基因小鼠乳腺中表达tPA的最高量分别为82.5μg/mL、674μg/mL,GH/tPA双转基因小鼠乳腺中表达tPA的量明显高于tPA单转基因(P<0.05).在小鼠的整个生长周期内,单、双转基因与正常非转基因小鼠的体质量增长均没有显著的差异(P>0.05).结论 本实验成功地制备了GH/tPA双转基因小鼠,结果 表明GH基因导入小鼠体内能够显著地提高目的基因tPA的表达水平,且不会对转基因小鼠的生长发育造成任何明显的影响,这为将来制备高表达转基因动物生产医药蛋白及其育种奠定了基础.
ISSN:1673-4254
DOI:10.12122/j.issn.1673-4254.2021.11.08