用于四种主要作物转基因筛查检测的标准质粒分子的构建及应用

标准质粒分子能够及时满足转基因生物安全监管需求,被较多地用作转基因标准材料的替代品.本研究通过分析全球商业化种植和国内环境释放的水稻（Oryza sativa L.）、玉米（Zea mays L.）、大豆（Glycine max）和油菜（Brassica napus）4种主要转基因作物的分子特征,选取常用的扩增性较好的蔗糖磷酸合酶基因（sucrose phosphate synthase,SPS）作为内标准基因和外源花椰菜花叶病毒35S启动子（promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S）、胭脂碱合成酶基因终止子（terminator of n...

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Published in农业生物技术学报 Vol. 23; no. 9; pp. 1167 - 1177
Main Author 徐俊锋 汪小福 陈笑芸 彭城 徐晓丽 朱青 缪青梅
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 2015
Subjects
标准质粒
筛选检测
试用性
转基因生物（GMOs）
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ISSN1674-7968

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Summary:标准质粒分子能够及时满足转基因生物安全监管需求,被较多地用作转基因标准材料的替代品.本研究通过分析全球商业化种植和国内环境释放的水稻（Oryza sativa L.）、玉米（Zea mays L.）、大豆（Glycine max）和油菜（Brassica napus）4种主要转基因作物的分子特征,选取常用的扩增性较好的蔗糖磷酸合酶基因（sucrose phosphate synthase,SPS）作为内标准基因和外源花椰菜花叶病毒35S启动子（promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S）、胭脂碱合成酶基因终止子（terminator of nopaline synthase gene,tNOS）、苏云金芽胞杆菌基因（Bacillus thuringiensis,Bt）、双丙氨酰磷抗性基因（biolaphos resistance, Bar）、新霉素磷酸转移酶基因（neomycin phosphotransferase,NPTⅡ）和潮霉素磷酸转移酶基因（hygromycin B phosphotransferase,Hpt）作为水稻转基因筛查靶标序列;选取淀粉合成酶基因（zSSⅡb）作为内标准基因和外源CaMV35S、tNOS、Bar作为玉米转基因筛查靶标序列;选取凝集素前体蛋白基因（Lectin）作为内标准基因和外源CaMV35S、tNOS、胰蛋白酶抑制剂基因（cowpea trypsin inhibitor gene,CpTi）、烯醇式丙酮基莽草酸磷酸合成酶基因（enolpyruvylshikimate phosphate synthase,EPSPS）作为大豆转基因筛查靶标序列;选取高移动簇蛋白基因（high mobile group protein,HMG）作为内标准基因和外源CaMV35S、玄参花叶病毒35S启动子（Figwort mosaicvirus 35S,FMV35S）、烟草绒毡层特异启动子（tobaccotapetum specific promoter,PTa29）、胭脂碱合酶启动子（nopaline synthase promoter,P-nos）、tNOS、35S终止子（terminator-35S,T-35S）、TL-DNA基因7（g7）终止子作为油菜转基因筛查检测的目标序列.利用重叠PCR技术将这些筛查目标序列连接在一起,最终克隆到p
Bibliography:11-3342/S
Genetically modified organisms （GMOs）, Standard plasmid, Screening and detection, Trial evaluation
Plasmid molecule worked as reference material has been shown to be a good alternative in genetically modified organisms （GMOs） detection, and can promptly satisfy the regulatory requirements of GMOs. In this study, according to the transgenic information of 4 main crops including rice （Oryza sativa L.）, maize （Zea mays L.）, soybean （Glycine max） and rape （Brassica aapus）, 4 types of plasmids for GMO screening were developed and confirmed. The constructed pMD-rice contained 7 target elements including promoter of Cauliflower mosaic virus （CaMV35S）, terminator of nopaline synthase （tNOS） and selective marker genes, such as biolaphos resistance （Bar）, neomycin phosphotransferase （NPT Ⅱ ） and hygromycin B phosphotransferase （Hpt）, insect resistant gene of Bacillus thuringiensis （Bt） and a rice endogenous reference gene of sucrose phosphate synthase （SPS） were selected. The constructed pMD-maize was consisted
ISSN:1674-7968