携带Bcl-2基因的慢病毒对原代培养的人卵巢颗粒细胞的影响

目的探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对体外培养的原代人卵巢颗粒细胞感染效率及对细胞凋亡的影响。方法构建携带Bcl-2基因的慢病毒载体，包装成高滴度慢病毒，将重组慢病毒在体外分别以不同感染复数（MOI）值（10、50、100、200、400）感染人卵巢原代颗粒细胞，观察感染24、48、72、96h后的感染效率及细胞增殖情况；将人卵巢颗粒培养24h后，分为3组。实验组：加MOI值为100的重组慢病毒GC-FU-Bcl-2；空白对照组：不加病毒；空载体对照组：加空载病毒GC-FU-EGFP。转染后第3、7天，采用Westernblotting及反转录聚合酶链反应（RT．PCR）分别检测目的基因Bcl-...

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Published in解放军医学杂志 Vol. 37; no. 8; pp. 760 - 764
Main Author 王雪峰 何援利 刘木彪 付霞霏
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 2012
Subjects
bcl-2
卵巢
基因
慢病毒感染
粒层细胞
细胞凋亡
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ISSN0577-7402

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Summary:目的探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对体外培养的原代人卵巢颗粒细胞感染效率及对细胞凋亡的影响。方法构建携带Bcl-2基因的慢病毒载体，包装成高滴度慢病毒，将重组慢病毒在体外分别以不同感染复数（MOI）值（10、50、100、200、400）感染人卵巢原代颗粒细胞，观察感染24、48、72、96h后的感染效率及细胞增殖情况；将人卵巢颗粒培养24h后，分为3组。实验组：加MOI值为100的重组慢病毒GC-FU-Bcl-2；空白对照组：不加病毒；空载体对照组：加空载病毒GC-FU-EGFP。转染后第3、7天，采用Westernblotting及反转录聚合酶链反应（RT．PCR）分别检测目的基因Bcl-2在人卵巢原代颗粒细胞中的蛋白及mRNA的表达水平。同时转染后第3天采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果原代培养的人卵巢颗粒细胞24h即贴壁，集落样生长，呈多角形或梭形；当MOI为100时，细胞的形态和生长不受影响，且感染效率较高，感染后72h达高峰，感染率达60％。携带Bcl-2基因的慢病毒感染靶细胞后，实验组中检测到Bcl-2基因及蛋白的表达，且卵巢颗粒细胞的凋亡率明显低于空载体对照组。结论携带Bcl-2基因的慢病毒感染原代培养的人卵巢颗粒细胞后可过度分泌Bcl-2蛋白，抑制细胞凋亡。
Bibliography:genes, bcl-2; lentivirus infections; ovary; granulosa cells; apoptosis
Objective To investigate the infectious effect of lentivirus carrying Bcl-2 gene on primary human ovarian granulosa cells （GCs） and its potentiality to induce apoptosis. Methods The lentivirus vector carrying Bcl-2 gene （pGC-FU- EGFP-bcl-2） was constructed and condensed to a high titer. The recombinant lentivirus with different MOI （10, 50, 100, 200, 400） were used to infect primary human ovarian GCs, and then the infection rate and cell proliferation of GCs were observed at 24, 48, 72 and 96 hours after infection. The GCs were incubated for 24 hours, and then divided into 3 groups： experimental group （GC-FU- Bcl-2 with MOI 100 was added into GCs）, normal control group （only GCs）, and empty vector control group （only the empty vector pGC-FU-EGFP was added into GCs）. The expressions of Bcl-2 protein and mRNA in GCs were detected by Western blotting and RT-PCR, respectively, at the 3rd and 7th day after infection, and the apoptosis rate of GC
ISSN:0577-7402