阿霉素诱导MCF 10A上皮细胞衰老模型的构建

Q71%Q255; 本研究旨在构建稳定的上皮细胞衰老模型,以期用于衰老细胞清除剂(senolytics)药物的筛选和评价研究.探究了阿霉素(doxorubicin)诱导人非转化乳腺上皮细胞系MCF 10A衰老的最佳条件,包括最佳诱导浓度、最佳干预时长和最佳衰老天数,并多维度验证了 MCF 10A作为细胞衰老模型的可行性.阿霉素诱导MCF 10A细胞衰老的最佳条件是:用0.6 μmol/L的阿霉素处理16 h在第8 d MCF 10A细胞达到最佳衰老状态.在最佳诱导条件下,加药组的衰老相关-β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-ga...

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Published in中国生物化学与分子生物学报 Vol. 41; no. 1; pp. 147 - 155
Main Authors 王增盛, 牛祖彪, 张波, 郝佳慧, 朱一超, 杨瑞刚, 任禾, 刘辰瑜, 孙强, 任立成
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室,北京 100038%海南医科大学基础医学与生命科学学院热带转化医学教育部重点实验室,生物学教研室,海口 571199 20.01.2025
军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071%军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071%军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071
海南医科大学基础医学与生命科学学院热带转化医学教育部重点实验室,生物学教研室,海口 571199
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ISSN1007-7626
DOI10.13865/j.cnki.cjbmb.2024.11.1342

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Abstract Q71%Q255; 本研究旨在构建稳定的上皮细胞衰老模型,以期用于衰老细胞清除剂(senolytics)药物的筛选和评价研究.探究了阿霉素(doxorubicin)诱导人非转化乳腺上皮细胞系MCF 10A衰老的最佳条件,包括最佳诱导浓度、最佳干预时长和最佳衰老天数,并多维度验证了 MCF 10A作为细胞衰老模型的可行性.阿霉素诱导MCF 10A细胞衰老的最佳条件是:用0.6 μmol/L的阿霉素处理16 h在第8 d MCF 10A细胞达到最佳衰老状态.在最佳诱导条件下,加药组的衰老相关-β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色阳性率达到 97%;同时,检测 mRNA、蛋白质和免疫荧光(immunofluorescence,IF)的表达,结果显示:加药组细胞相对于正常细胞的衰老相关分泌表型(senescence-associated aecretory phenotype,SASP)、p16、p21 和 p53 蛋白质的表达量均显著升高,核纤层蛋白B1(lamin B1)显著下降(P<0.001).加药组细胞与衰老细胞特有特征一致.本研究用阿霉素成功构建了 MCF 10A上皮细胞衰老模型,为基于衰老上皮细胞的衰老细胞清除剂的筛选奠定了研究基础.
AbstractList Q71%Q255; 本研究旨在构建稳定的上皮细胞衰老模型,以期用于衰老细胞清除剂(senolytics)药物的筛选和评价研究.探究了阿霉素(doxorubicin)诱导人非转化乳腺上皮细胞系MCF 10A衰老的最佳条件,包括最佳诱导浓度、最佳干预时长和最佳衰老天数,并多维度验证了 MCF 10A作为细胞衰老模型的可行性.阿霉素诱导MCF 10A细胞衰老的最佳条件是:用0.6 μmol/L的阿霉素处理16 h在第8 d MCF 10A细胞达到最佳衰老状态.在最佳诱导条件下,加药组的衰老相关-β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色阳性率达到 97%;同时,检测 mRNA、蛋白质和免疫荧光(immunofluorescence,IF)的表达,结果显示:加药组细胞相对于正常细胞的衰老相关分泌表型(senescence-associated aecretory phenotype,SASP)、p16、p21 和 p53 蛋白质的表达量均显著升高,核纤层蛋白B1(lamin B1)显著下降(P<0.001).加药组细胞与衰老细胞特有特征一致.本研究用阿霉素成功构建了 MCF 10A上皮细胞衰老模型,为基于衰老上皮细胞的衰老细胞清除剂的筛选奠定了研究基础.
Abstract_FL This research aims to construct a stable epithelial cell senescence model for screening and e-valuation of senolytics.We explored the optimal conditions for doxorubicin-induced senescence of non-transformed epithelial cells MCF 10A,including the optimal induction concentration,the optimal inter-vention time,and the optimal senescence duration,and confirmed the feasibility of MCF 10A as an epi-thelial senescence model by multiple ways.The optimal condition for Doxorubicin-induced senescence of MCF 10A cells was treatment with 0.6 μmol/L Doxorubicin for 16 h to achieve the best senescence state on the 8th day.Under the optimal induction conditions,the positive rate of senescence-associated β-gal-actosidase(SA-β-gal)staining in the treated group reached 97%.At the same time,biochemical results of detecting the expression of mRNA,proteins,and immunofluorescence demonstrated that the expression levels of senescence-associated secretory phenotype(SASP),p16,p21 and p53 in the treated group were significantly higher than those in the control cells,and Lamin B1 was significantly decreased(P<0.001),which were consistent with the specific characteristics of senescence.In summary,an epithelial senescence model was successfully induced in MCF 10A cells by Doxorubicin in this study,which will promote the screening of senolytics for senescent epithelial cells.
Author 刘辰瑜
牛祖彪
王增盛
杨瑞刚
任立成
郝佳慧
张波
任禾
孙强
朱一超
AuthorAffiliation 海南医科大学基础医学与生命科学学院热带转化医学教育部重点实验室,生物学教研室,海口 571199;军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071%军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071%军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071;首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室,北京 100038%海南医科大学基础医学与生命科学学院热带转化医学教育部重点实验室,生物学教研室,海口 571199
AuthorAffiliation_xml – name: 海南医科大学基础医学与生命科学学院热带转化医学教育部重点实验室,生物学教研室,海口 571199;军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071%军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071%军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071;首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室,北京 100038%海南医科大学基础医学与生命科学学院热带转化医学教育部重点实验室,生物学教研室,海口 571199
Author_FL ZHANG Bo
REN Li-Cheng
LIU Chen-Yu
WANG Zeng-Sheng
HAO Jia-Hui
SUN Qiang
ZHU Yi-Chao
YANG Rui-Gang
NIU Zu-Biao
REN He
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Discipline Anatomy & Physiology
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ISSN 1007-7626
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Issue 1
Keywords 阿霉素
衰老相关-β-半乳糖苷酶
衰老相关分泌表型
epithelial cell senescence model
上皮细胞衰老模型
人非转化乳腺上皮细胞系MCF 10A
doxorubicin
β-galactosidase(SA-β-gal)
MCF 10A
senescence-associated secretory phenotype(SASP)
Language Chinese
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PublicationTitle 中国生物化学与分子生物学报
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PublicationYear 2025
Publisher 首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室,北京 100038%海南医科大学基础医学与生命科学学院热带转化医学教育部重点实验室,生物学教研室,海口 571199
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