阿霉素诱导MCF 10A上皮细胞衰老模型的构建

• Published in: 中国生物化学与分子生物学报 Vol. 41; no. 1; pp. 147 - 155
• Main Authors: 王增盛, 牛祖彪, 张波, 郝佳慧, 朱一超, 杨瑞刚, 任禾, 刘辰瑜, 孙强, 任立成
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室,北京 100038%海南医科大学基础医学与生命科学学院热带转化医学教育部重点实验室,生物学教研室,海口 571199 20.01.2025; 军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071%军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071%军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室,北京 100071; 海南医科大学基础医学与生命科学学院热带转化医学教育部重点实验室,生物学教研室,海口 571199
• Subjects: 阿霉素; 衰老相关-β-半乳糖苷酶; 衰老相关分泌表型; epithelial cell senescence model; 上皮细胞衰老模型; 人非转化乳腺上皮细胞系MCF 10A; doxorubicin; β-galactosidase(SA-β-gal); MCF 10A; senescence-associated secretory phenotype(SASP)
• ISSN: 1007-7626
• DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2024.11.1342

Q71%Q255; 本研究旨在构建稳定的上皮细胞衰老模型,以期用于衰老细胞清除剂(senolytics)药物的筛选和评价研究.探究了阿霉素(doxorubicin)诱导人非转化乳腺上皮细胞系MCF 10A衰老的最佳条件,包括最佳诱导浓度、最佳干预时长和最佳衰老天数,并多维度验证了 MCF 10A作为细胞衰老模型的可行性.阿霉素诱导MCF 10A细胞衰老的最佳条件是:用0.6 μmol/L的阿霉素处理16 h在第8 d MCF 10A细胞达到最佳衰老状态.在最佳诱导条件下,加药组的衰老相关-β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色阳性率达到 97％;同时,检测 mRNA、蛋白质和免疫荧光(immunofluorescence,IF)的表达,结果显示:加药组细胞相对于正常细胞的衰老相关分泌表型(senescence-associated aecretory phenotype,SASP)、p16、p21 和 p53 蛋白质的表达量均显著升高,核纤层蛋白B1(lamin B1)显著下降(P＜0.001).加药组细胞与衰老细胞特有特征一致.本研究用阿霉素成功构建了 MCF 10A上皮细胞衰老模型,为基于衰老上皮细胞的衰老细胞清除剂的筛选奠定了研究基础.