沉默FOXO1基因对人主动脉血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响

• Published in: 吉林大学学报（医学版） Vol. 50; no. 2; pp. 431 - 441
• Main Authors: 王琳茹, 张晶, 赵冬婵, 王晋军, 胡文贤
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 青岛大学附属青岛市海慈医院 青岛市中医医院血管外科,山东 青岛 266000 28.03.2024
• Subjects: 细胞凋亡; 自噬; 人血管平滑肌细胞; 腹主动脉瘤; Abdominal aortic aneurysm; Human vascular smooth muscle cell; 叉头框转录因子O1; Autophagy; Forkhead box transcription factor O1; Apoptosis
• ISSN: 1671-587X
• DOI: 10.13481/j.1671-587X.20240216

R732.2; 目的:探讨叉头框转录因子O1(FOXO1)基因对腹主动脉瘤(AAA)血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制.方法:收集19例AAA患者动脉瘤组织(AAA组)及邻近正常主动脉组织(对照组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平,透射电镜观察 2 组研究对象动脉瘤组织中自噬溶酶体形成情况;Western blotting法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1及自噬相关蛋白卷曲螺旋肌球蛋白样B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)结合蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3 α(LC3)和P62蛋白表达水平.体外培养人主动脉血管平滑肌细胞(hVSMCs),并采用FOXO1 siRNA(si-FOXO1)及其阴性对照(si-NC)慢病毒感染hVSMCs,10 μmol·L-1血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)联合自噬激活剂雷帕霉素(Rap)进行干预,将细胞分为空白对照组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+si-NC组、Ang Ⅱ+si-FOXO1组、Ang Ⅱ+si-NC+ Rap组和Ang Ⅱ+si-FOXO1+Rap组.CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA法检测各组细胞上清中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,RT-qPCR法检测各组细胞中FOXO1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中FOXO1、Bcl-2、Bcl-2 相关X蛋白(Bax)、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(Cleaved caspase-3)、Beclin1、LC3 和P62 蛋白表达水平.结果:与对照组比较,AAA组动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平升高(P<0.05),自噬溶酶体数量增多(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平和LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值升高(P<0.05),P62蛋白表达水平降低(P<0.05).与空白对照组比较,Ang Ⅱ组hVSMCs增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9 水平升高(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved caspase-3 和Beclin1 蛋白表达水平及LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值升高(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平降低(P<0.05);与