CRP敲除通过介导Kupffer细胞分化对大鼠血清总胆固醇水平的影响

• Published in: 中国病理生理杂志 Vol. 39; no. 6; pp. 1030 - 1036
• Main Authors: 刘芳英, 张雪娣, 王帅, 黄长浩, 宋业鼎, 穆云萍, 李芳红, 赵子建
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 广东工业大学生物医药学院,广东 广州510006 01.06.2023
• Subjects: C-反应蛋白; 库普弗细胞; 胆固醇逆向转运; 细胞分化
• ISSN: 1000-4718
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2023.06.009

R364.5%R363.2; 目的:研究C-反应蛋白(CRP)基因全身敲除介导肝巨噬细胞[库普弗(Kupffer)细胞]分化以及对大鼠血清总胆固醇水平的影响.方法:利用TALEN技术构建CRP基因敲除大鼠模型,PCR技术鉴定其基因型,筛选纯合子后代(纯合敲除为CRP-/-,野生型为CRP+/+),随机选择10只SPF级雄性CRP-/-大鼠(8周龄)为模型组,10只SPF级雄性CRP+/+大鼠(8周龄)为正常对照组.用Western blot、RT-qPCR和免疫组织化学技术验证CRP在CRP-/-大鼠重要脏器中的表达情况;胆固醇试剂盒检测大鼠血清总胆固醇水平;RT-qPCR检测CRP-/-大鼠肝脏M1型巨噬细胞中CCL2、CCL3和IL-6表达水平,以及M2型巨噬细胞中IL-4、IL-10和转化生长因子β(TGF-β)表达水平;用分子生物学技术检测CRP-/-大鼠肝脏中M1型巨噬细胞标志物CD68、M2型巨噬细胞标志物CD163及胆固醇逆向转运(RCT)关键蛋白B族1型清道夫受体(SR-B1)的表达水平.结果:与CRP+/+大鼠相比,CRP-/-大鼠心、肝、肾、脾等重要脏器未检测到CRP表达(P＜0.01),表明CRP-/-大鼠模型构建成功.CRP-/-大鼠血清总胆固醇显著低于CRP+/+大鼠(P＜0.01),肝脏中IL-6、CCL2和CCL3水平显著降低,而IL-4、IL-10和TGF-β表达显著增高(P＜0.01);M1型巨噬细胞标志物CD68表达水平显著下降,而M2型巨噬细胞标志物CD163表达水平显著上升(P＜0.01);CRP-/-大鼠肝脏内SR-B1水平显著高于CRP+/+大鼠(P＜0.05).结论:CRP基因全身敲除影响Kupffer细胞分化并降低大鼠血清总胆固醇水平,具体表现为:促进大鼠肝脏内单核细胞分化为M2型巨噬细胞,并抑制其向M1型巨噬细胞分化,显著促进大鼠肝脏内RCT从而降低大鼠血清总胆固醇.