基于Cell-SELEX技术的去势抵抗性前列腺癌细胞核酸适配体的筛选与鉴定

R73-3; 目的 利用细胞指数富集配基的系统进化技术(Cell-SELEX)筛选去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞特异性核酸适配体.方法 以人CRPC细胞C4-2基因组作为正筛选细胞,以激素依赖性前列腺癌细胞LNCap基因组作为负筛选细胞进行Cell-SELEX筛选.PCR上游引物的5'端标记FITC,下游引物的5'端标记生物素,将每一轮次筛选得到的DNA产物为模板进行PCR扩增、纯化.用生物素-链霉亲和素磁珠分离法将PCR产物分离后获得的产物用于下一轮次的筛选,用流式细胞仪监测Cell-SELEX筛选进程;将最后一轮次筛选所得的DNA产物行PCR扩增纯化、克隆及测序,预...

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Published in西安交通大学学报（医学版） Vol. 42; no. 5; pp. 687 - 692
Main Authors 仲津漫, 丁健科, 邓蕾, 向颖, 刘朵朵, 杨全新
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 西安交通大学第二附属医院医学影像科,陕西西安 710004%空军军医大学第一附属医院整形外科,陕西西安 710032 05.09.2021
Subjects
去势抵抗性前列腺癌
前列腺癌
细胞SELEX
适配体
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ISSN1671-8259
DOI10.7652/jdyxb202105008

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Summary:R73-3; 目的 利用细胞指数富集配基的系统进化技术(Cell-SELEX)筛选去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞特异性核酸适配体.方法 以人CRPC细胞C4-2基因组作为正筛选细胞,以激素依赖性前列腺癌细胞LNCap基因组作为负筛选细胞进行Cell-SELEX筛选.PCR上游引物的5'端标记FITC,下游引物的5'端标记生物素,将每一轮次筛选得到的DNA产物为模板进行PCR扩增、纯化.用生物素-链霉亲和素磁珠分离法将PCR产物分离后获得的产物用于下一轮次的筛选,用流式细胞仪监测Cell-SELEX筛选进程;将最后一轮次筛选所得的DNA产物行PCR扩增纯化、克隆及测序,预测核酸适配体的二级结构,计算适配体的平衡解离常数.用流式细胞术、细胞免疫荧光及组织免疫荧光检测适配体对CRPC组织细胞的特异性结合.结果 随着Cell-SELEX的筛选进程,DNA产物与CRPC细胞的结合率逐渐增加,至第14轮达到最高.DNA结构预测分析显示,核酸适配体CRPC-1和CRPC-2的二级结构主要为茎环结构.流式细胞术和细胞免疫荧光实验显示,CRPC-1和CRPC-2可特异性靶向CRPC细胞C4-2;组织免疫荧光实验显示,CRPC-1能特异性识别并结合CRPC组织.结论 Cell-SELEX可筛选CRPC细胞特异性核酸适配体,对靶向诊断技术的研发和及时调整临床治疗方案、改善患者预后具有重要意义.
ISSN:1671-8259
DOI:10.7652/jdyxb202105008