人KIBRA基因真核表达载体的构建及生物信息学分析

R393; 目的 构建人的肾脏脑蛋白(human kidney and brain protein,KIBRA)编码区全长的真核表达载体,为在乳腺癌细胞水平研究KIBRA生物学功能提供模型.方法 提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录后再通过PCR扩增KIBRA(NM_001161661.2)编码区全长,并克隆至真核表达载体pCMV-Blank上,鉴定正确后命名为pCMV-KIBRA.将其转染MCF7细胞,48h后实时定量PCR和Western blotting检测KIBRA的表达.结合生物信息学软件分析KIBRA的一级、二级、三级结构和转录后修饰位点.结果 菌液PCR、双酶切和测序结果...

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Published in西安交通大学学报（医学版） Vol. 42; no. 2; pp. 323 - 332
Main Authors 王博, 宋少苒, 田碧霞, 杨泽健, 张妙, 高小倩, 孙伟, 蒋依娜, 刘培军
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 西安交通大学医学部,陕西西安 710061%西安交通大学第一附属医院病理科,陕西西安 710061 05.03.2021
陕西省肿瘤精准医学重点实验室,陕西西安 710061%西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安 710061
西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安 710061
Subjects
KIBRA
真核表达
基因克隆
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ISSN1671-8259
DOI10.7652/jdyxb202102027

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Summary:R393; 目的 构建人的肾脏脑蛋白(human kidney and brain protein,KIBRA)编码区全长的真核表达载体,为在乳腺癌细胞水平研究KIBRA生物学功能提供模型.方法 提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录后再通过PCR扩增KIBRA(NM_001161661.2)编码区全长,并克隆至真核表达载体pCMV-Blank上,鉴定正确后命名为pCMV-KIBRA.将其转染MCF7细胞,48h后实时定量PCR和Western blotting检测KIBRA的表达.结合生物信息学软件分析KIBRA的一级、二级、三级结构和转录后修饰位点.结果 菌液PCR、双酶切和测序结果 均表明载体pCMV-KIBRA中插入的KIBRA序列正确.载体转染MCF7细胞可使KIBRA的mRNA和蛋白水平显著增高.生物信息学分析KIBRA由1119个氨基酸组成,存在52个磷酸化位点、1个乙酰化位点和5个泛素化位点,且二级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲.结论 成功构建人KIBRA编码区全长的真核表达载体,并在乳腺癌细胞系MCF7中过表达,为在乳腺癌中研究KIBRA的生物学功能奠定了基础.
ISSN:1671-8259
DOI:10.7652/jdyxb202102027