蓝舌病病毒、流行性出血病病毒和帕利亚姆血清群病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及应用

• Published in: 华南农业大学学报 Vol. 42; no. 3; pp. 17 - 25
• Main Authors: 杨振兴, 李占鸿, 肖雷, 谢佳芮, 廖德芳, 李卓然, 李华春, 朱建波, 杨恒
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 云南省畜牧兽医科学院/云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南 昆明 650224 01.05.2021
• Subjects: 帕利亚姆血清群病毒; 病毒检测; 蓝舌病病毒; 三重RT-qPCR; 流行性出血病病毒
• ISSN: 1001-411X
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.202007033

S852.65; [目的]建立蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)、流行性出血病病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)及帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup virus,PALV)快速筛查和诊断的三重RT-qPCR检测技术.[方法]选择BTV的NS3、EHDV的NS1以及PALV的VP7基因作为靶基因,设计3组特异性引物和探针,建立3种病毒的三重RT-qPCR检测方法.对检测方法的灵敏度、特异性和重复性进行验证,同时使用我国分离的BTV、EHDV与PALV不同血清型毒株和对应的阳性血液样本,与24个BTV血清型及6个EHDV血清型参考毒株对该三重法的检测效果进行验证.[结果]三重RT-qPCR的扩增效率均可达90％以上,对3种病毒核酸拷贝数的检测下限均为10μL?1级别,与单重法的检测灵敏度相当;与阿卡斑病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒和牛流行热病毒之间无交叉反应;Ct值批内、批间变异系数均在2％以内;可检测出24种BTV血清型、6种EHDV血清型与3种PALV血清型,具有群特异性;可有效检测血液中的病毒核酸,检测结果与单重法一致.[结论]本研究建立的BTV、EHDV与PALV三重RT-qPCR具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样本中对3种病毒的同时诊断与筛查.