四环素诱导的YAP1敲减系统的建立及其对胃癌细胞功能的影响

R34; 目的 建立一种四环素(tetracycline,DOX)诱导的基因敲减系统,并利用此系统研究YAP1对胃癌细胞功能的影响.方法 构建pLKO.1-tetON-YAP1敲减的慢病毒载体,酶切和测序方法检测载体构建成功与否;慢病毒感染胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28,建立DOX诱导的YAP1敲减的胃癌细胞系;RT-PCR检测YAP1 mRNA相对表达量,Western blotting检测YAP1蛋白水平变化;平板克隆实验检测细胞增殖情况;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移的情况.结果 构建四环素诱导的YAP1敲减的病毒质粒,酶切鉴定结果显示,在6000 bp和3000...

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Published in西安交通大学学报（医学版） Vol. 41; no. 5; pp. 690 - 695
Main Authors 王贺, 刘俊, 黄硕, 丁晓琛, 乔一桓, 姜勋亮, 闫静川, 李纪鹏
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 空军军医大学西京医院实验外科,陕西西安 710032 05.09.2020
空军军医大学西京医院消化病院消化外科,陕西西安 710032
空军军医大学基础医学院,陕西西安 710032%空军军医大学生物化学与分子生物学教研室,肿瘤生物学国家重点实验室,陕西西安 710032%空军军医大学基础医学院,陕西西安 710032%空军军医大学西京医院实验外科,陕西西安 710032%西安医学院临床医学院,陕西西安 710021%空军军医大学西京医院消化病院消化外科,陕西西安 710032%空军军医大学西京医院消化病院消化外科,陕西西安 710032
Subjects
胃癌
增殖
迁移
YAP1基因
shRNA
四环素诱导表达系统
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ISSN1671-8259
DOI10.7652/jdyxb202005011

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Summary:R34; 目的 建立一种四环素(tetracycline,DOX)诱导的基因敲减系统,并利用此系统研究YAP1对胃癌细胞功能的影响.方法 构建pLKO.1-tetON-YAP1敲减的慢病毒载体,酶切和测序方法检测载体构建成功与否;慢病毒感染胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28,建立DOX诱导的YAP1敲减的胃癌细胞系;RT-PCR检测YAP1 mRNA相对表达量,Western blotting检测YAP1蛋白水平变化;平板克隆实验检测细胞增殖情况;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移的情况.结果 构建四环素诱导的YAP1敲减的病毒质粒,酶切鉴定结果显示,在6000 bp和3000 bp处各有一条带,测序结果与设计的shRNA序列一致.包装慢病毒并感染胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28,DOX诱导组中,感染pLKO.1-tetON-YAP1的病毒的细胞中YAP1 mRNA的相对表达量和蛋白水平明显下调;而未诱导组则无明显变化.平板克隆形成实验结果显示,DOX诱导后shYAP1组克隆形成数明显降低;未诱导组无明显变化.划痕实验和Transwell迁移实验结果显示,DOX诱导后shYAP1组表达后细胞迁移能力受到抑制,未诱导组无明显变化.结论 成功建立了四环素诱导的慢病毒系统,利用此系统敲减胃癌细胞YAP1基因,胃癌细胞增殖和迁移能力受到抑制.
ISSN:1671-8259
DOI:10.7652/jdyxb202005011