沉默环磷腺苷效应元件结合蛋白1对乳腺癌细胞生物学行为的影响

R737.9; 目的 探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白1(cAMP-response element binding protein 1,CREB1)基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.方法 针对人CREB1的基因序列设计并构建2条短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),采用慢病毒转染shRNA至人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞系抑制其CREB1的表达.将实验组分为shCREB1#1组和shCREB1#2组,同时将shSCR空载质粒转染至上述细胞系作为阴性对照组.采用实时定量PCR和Western印迹法检测转染效...

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Published in中国临床医学 Vol. 29; no. 2; pp. 153 - 160
Main Authors 辛肇晨, 吴茜, BANG SOYEON, 王红, 杨子昂, 张宏伟
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 复旦大学附属中山医院普通外科,上海 200032 01.04.2022
Subjects
乳腺癌
增殖
MCF-7
环磷腺苷效应元件结合蛋白1
迁移
凋亡
MDA-MB-231
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ISSN1008-6358
DOI10.12025/j.issn.1008-6358.2022.20210844

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Summary:R737.9; 目的 探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白1(cAMP-response element binding protein 1,CREB1)基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.方法 针对人CREB1的基因序列设计并构建2条短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),采用慢病毒转染shRNA至人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞系抑制其CREB1的表达.将实验组分为shCREB1#1组和shCREB1#2组,同时将shSCR空载质粒转染至上述细胞系作为阴性对照组.采用实时定量PCR和Western印迹法检测转染效率;CCK-8法检测细胞增殖能力;集落形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western印迹法检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达.结果 相较于阴性对照组,shCREB1#1和shCREB1#2组MCF-7和MDA-MB-231细胞CREB1基因的mRNA和蛋白表达水平均下降(P＜0.001).沉默CREB1后,MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力减弱,且凋亡率升高(P＜0.05).沉默CREB1使细胞周期蛋白CDK2、CDK4、CDK6、CyclinD1以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达下调,而使促凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达上调(P＜0.05).结论 沉默CREB1可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并诱导其凋亡.
ISSN:1008-6358
DOI:10.12025/j.issn.1008-6358.2022.20210844