2群坦布苏病毒NS1蛋白抑制鸭Ⅰ型干扰素产生的机制研究

• Published in: 广东农业科学 Vol. 51; no. 7; pp. 151 - 160
• Main Authors: 黄允真, 张俊勤, 李林林, 董嘉文, 向勇, 廖明, 孙敏华
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 广东省农业科学院动物卫生研究所/农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,广东 广州 510640 2024
• Subjects: RIG-I信号通路; type I interferon; RIG-I signaling pathway; 非结构蛋白; TBK1 phosphorylation; Tembusu virus; TBK1磷酸化; non-structural protein; 坦布苏病毒; I型干扰素
• ISSN: 1004-874X
• DOI: 10.16768/j.issn.1004-874X.2024.07.014

S855.3; [目的]坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)病是重要的水禽传染病,研究发现TMUV感染鸭早期,2 群TMUV在肝、肾、脑等组织中的病毒拷贝数显著高于 3 群TMUV.研究 2 群TMUV非结构蛋白(Non-structural protein,NS protein)和 3 群TMUV NS蛋白对鸭天然免疫反应是否存在差异.[方法]以 2 群TMUV-JM株和 3 群TMUV-GX株为研究对象,构建两种毒株NS蛋白真核表达质粒,通过双荧光素酶报告系统研究NS蛋白对视黄酸诱导基因蛋白I(Retinoic acid-inducible gene protein I,RIG-I)诱导的β干扰素(β interferon,IFN-β,为I型)启动子活性的影响.构建重组嵌合NS1 蛋白真核表达质粒,通过激光共聚焦、免疫共沉淀、Western Blotting技术研究NS1 与RIG-I信号通路中关键分子的互作区域.利用反向遗传操作系统构建NS1 重组嵌合病毒,研究NS1 在TMUV感染DEF细胞后对IFN-β产生的抑制作用.[结果]TMUV-JM株NS1 能抑制RIG-I诱导的IFN-β启动子活性,而TMUV-GX株NS1 对其无抑制作用.进一步研究发现,TANK结合激酶 1(TANK-binding kinase 1,TBK1)为TMUV-JM NS1 蛋白抑制RIG-I介导的I型IFN表达的作用节点分子,且NS1 蛋白 255～352 aa为发挥抑制作用的功能区域.TMUV-JM NS1与TBK1不存在直接相互作用,是间接降低TBK1磷酸化水平从而降低I型IFN的表达量.[结论]2 群TMUV NS1 具有抑制RIG-I信号通路的活性,并鉴定出其抑制功能的关键活性区域及作用的通路节点分子,明确 2 群TMUV NS1 通过间接抑制TBK1 磷酸化而影响鸭I型IFN产生.