PAI-1招募中性粒细胞调控IL-6/STAT3信号通路促进脂多糖诱导的肺细胞损伤

R563; 目的 探讨纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell,AECⅡ)损伤的调控作用及机制.方法 采用免疫印迹法和ELISA检测LPS处理后原代胎鼠AECⅡ细胞内、外PAI-1的表达量.通过CCK8和细胞迁移实验(Transwell),用PAI-1重组蛋白和PAI-039(PAI-1的抑制剂)检测PAI-1对中性粒细胞活力、趋化的影响.收集Transwell下室的细胞培养液和AECⅡ,...

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Published in中国临床医学 Vol. 29; no. 4; pp. 572 - 579
Main Authors 窦懋森, 金文婷, 宋元林, 潘珏
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 复旦大学附属中山医院感染病科,上海 200032%复旦大学附属中山医院呼吸与危重症医学科,上海 200032 01.08.2022
Subjects
脂多糖
纤溶酶原激活物抑制物-1
中性粒细胞
IL6/JAK/STAT3通路
肺泡Ⅱ型上皮细胞
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ISSN1008-6358
DOI10.12025/j.issn.1008-6358.2022.20220507

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Summary:R563; 目的 探讨纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell,AECⅡ)损伤的调控作用及机制.方法 采用免疫印迹法和ELISA检测LPS处理后原代胎鼠AECⅡ细胞内、外PAI-1的表达量.通过CCK8和细胞迁移实验(Transwell),用PAI-1重组蛋白和PAI-039(PAI-1的抑制剂)检测PAI-1对中性粒细胞活力、趋化的影响.收集Transwell下室的细胞培养液和AECⅡ,采用ELISA检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)和血小板/内皮黏附因子(platelet/endothelial cell adhesion molecule,PECAM)等促炎性因子水平.采用免疫印迹法检测AECⅡ内STAT3 Tyr705和Ser727位点的磷酸化情况.同时通过台盼蓝染色观察AECⅡ细胞损伤程度.用STAT3磷酸化位点抑制剂抑制其磷酸化后,观察LPS刺激后AECⅡ的损伤程度.结果 LPS显著促进AECⅡ死亡,促进PAI-1表达及释放(P<0.01);PAI-1重组蛋白能抑制中性粒细胞死亡,并促进其迁移和释放IL-6(P<0.001),使AECⅡ中STAT3 Tyr705位点的磷酸化水平升高.分别用PAI-039和AZD1480抑制PAI-1的表达及JAK激活时,STAT3的Tyr705和Ser727位点磷酸化水平受到抑制,LPS诱导的AECⅡ损伤缓解.结论 PAI-1能招募中性粒细胞促进其释放大量IL-6,提高JAK介导的STAT3 Tyr705位点的磷酸化水平,进而促进LPS诱导的AECⅡ损伤.
ISSN:1008-6358
DOI:10.12025/j.issn.1008-6358.2022.20220507