糖尿病小鼠海马神经元中自噬增强与热休克蛋白B8上调相关

目的:探讨糖尿病小鼠海马神经元中热休克蛋白B8（HSPB8）及自噬变化。方法:选取8周龄雄性C57BL/KS db/db小鼠10只为糖尿病组，野生型（db/m）小鼠10只为对照组。测定空腹血糖及体重，通过Western blot检测各组海马组织中HSPB8、Bcl-2相关永生化基因3（BAG3）、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1-轻链3（LC3）表达。培养HT-22细胞分别用18、25和33 mmol/L的葡萄糖浓度刺激48 h，作为高糖体外模型，Western blot检测各组HSPB8、BAG3、Beclin-1和LC3蛋白表达。应用细胞转染技术分别过表达和沉默HSPB8蛋白后...

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Published in中华糖尿病杂志 Vol. 12; no. 8; pp. 631 - 636
Main Authors 李亚, 李金凤, 李小承, 马卫国, 谢传庆
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 西安医学院一附属医院内分泌科　710077 27.08.2020
Subjects
Heat-shock protein B8
自噬
Diabetes mellitus
海马
糖尿病
Autophagy
Hippocampus
热休克蛋白B8
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ISSN1674-5809
DOI10.3760/cma.j.cn115791-20191106-00411

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Summary:目的:探讨糖尿病小鼠海马神经元中热休克蛋白B8（HSPB8）及自噬变化。方法:选取8周龄雄性C57BL/KS db/db小鼠10只为糖尿病组，野生型（db/m）小鼠10只为对照组。测定空腹血糖及体重，通过Western blot检测各组海马组织中HSPB8、Bcl-2相关永生化基因3（BAG3）、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1-轻链3（LC3）表达。培养HT-22细胞分别用18、25和33 mmol/L的葡萄糖浓度刺激48 h，作为高糖体外模型，Western blot检测各组HSPB8、BAG3、Beclin-1和LC3蛋白表达。应用细胞转染技术分别过表达和沉默HSPB8蛋白后，Western blot检测BAG3，P62和LC3蛋白表达。应用33 mmol/L高糖刺激HT-22细胞，采用mRFP-GFP-LC3工具质粒观察自噬水平。组间比较采用独立样本 t检验和单因素方差分析。 结果:与db/m组相比，db/db小鼠海马组织中HSPB8、BAG3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1表达均升高（1.647±0.150比0.781±0.181、1.832±0.243比0.821±0.197、0.756±0.104比0.518±0.170、1.431±0.201比1.014±0.118， t=4.130~9.131，均 P<0.05）。与对照组相比，高糖刺激的HT-22细胞中HSPB8、BAG3、Beclin-1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平均呈浓度依赖性升高（ P<0.05）。较空载组，HSPB8沉默组BAG3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达降低，P62表达反之，而HSPB8过表达组BAG3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平上调，P62表达下降（0.481±0.161比1.804±0.147、0.615±0.311比2.091±0.210、1.013±0.213比1.615±0.194、1.211±0.154比0.978±0.187；1.817±0.152比0.891±0.151、1.112±0.091比0.743±0.162、1.692±0.170比0.587±0.132、1.236±0.186比1.751±0.131； t=5.560~20.510，均 P<0.05）。RFP-GFP-LC3荧光双标质粒显示，较空载组，高糖刺激HSPB8过表达的HT-22 细胞中红色荧光斑点增多（2.059
ISSN:1674-5809
DOI:10.3760/cma.j.cn115791-20191106-00411