银染高尔基染色法用于神经元完整结构成像

• Published in: 应用化学 Vol. 41; no. 5; pp. 677 - 686
• Main Authors: 周峰, 蔡小青, 汤乔伟, 诸颖, 王丽华, 胡钧
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 上海大学理学院化学系,材料生物学研究所,上海 200444 01.05.2024; 中国科学院大学,北京 100049; 中国科学院上海应用物理研究所,中国科学院微观界面物理与探测重点实验室,上海 201800; 中国科学院大学,北京 100049%中国科学院上海应用物理研究所,中国科学院微观界面物理与探测重点实验室,上海 201800; 中国科学院上海高等研究院,上海光源科学中心,上海 201210%祥符实验室,嘉善 314102%中国科学院上海高等研究院,上海光源科学中心,上海 201210
• Subjects: Silver Golgi staining; Neuronal morphology; 神经元形态; Silver nitrate; Potassium dichromate; 重铬酸钾; 硝酸银; 银染高尔基染色
• ISSN: 1000-0518
• DOI: 10.19894/j.issn.1000-0518.230305

O611; 高尔基染色是神经元树突和树突棘可视化的经典方法,目前仍被广泛用于神经元形态可视化.银高尔基染色目前存在易产生黑色沉淀、染色神经元形态结构不完整等问题.对重铬酸钾(K2Cr2O7)和硝酸银(AgNO3)如何影响银染高尔基染色方法的染色效果进行了研究,通过研究染色液组成成分重铬酸钾、硝酸银质量浓度变化和组分的不同作用方式,实现了对银染高尔基染色方法的优化.结果表明,35 mg/mL多聚甲醛(Paraformaldehyde,PFA)和20 mg/mL K2Cr2O7混合液染色效果要明显优于20 mg/mL K2Cr2O7单独染色效果,在K2Cr2O7的质量浓度优化过程中,80 mg/mL K2Cr2O7的染色效果最佳,35 mg/mL PFA与20 mg/mL K2Cr2O7混合溶液和80 mg/mL K2Cr2O7最佳染色时长比为3:1,染色过程中AgNO3的最佳质量浓度为10 mg/mL,在最终的染色液组成成分以及作用方式中40 mg/mL PFA固定2d、35 mg/mL PFA和20 mg/mL K2Cr2O7混合溶液处理3 d、80 mg/mL K2Cr2O7处理1 d和10 mg/mL AgNO3处理5 d对脑组织神经元形态的可视化具有最佳效果.优化后的银染高尔基染色方法可实现对神经元的完整形态结构染色,同时在染色过程也将产生更少的成像杂质沉淀噪点.该工作将提供一种新的高尔基改良染色方法,实现神经元完整形态结构的染色,有望为研究脑神经元结构变化与脑疾病之间的关系提供新的染色方法.