抗大口黑鲈蛙虹彩病毒卵黄抗体的制备及其间接ELISA检测方法的建立

S943; 大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)是我国大口黑鲈养殖中的常发病原,主要引起大口黑鲈病毒性溃疡病,制约其养殖业的健康发展.为探究卵黄抗体在防控LMBV中的潜在作用,利用LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡,制备了抗LMBV卵黄抗体;通过筛选捕获物浓度、包被条件和封闭条件,建立了抗LMBV卵黄抗体的间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法;使用构建的方法,评估了 LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡后卵黄抗体的效价消减规律.结果表明,1‰(φ)β-丙内酯4℃作用72 h可完全灭活LMBV.间接ELISA反应中,每孔...

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Published in南方水产科学 Vol. 20; no. 2; pp. 129 - 139
Main Authors 李硕, 陈静妮, 赵立宁, 黄春萍, 黄锦炉, 王贵平, 仲颖
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 广东海大畜牧兽医研究院有限公司,广东广州 511400%广东海大畜牧兽医研究院有限公司,广东广州 511400%广东海大集团股份有限公司,广东广州 511400 01.04.2024
农业农村部微生态资源养殖利用企业重点实验室,广东广州 511400
广东海大集团股份有限公司,广东广州 511400
Subjects
蛙虹彩病毒
Largemouth bass ranavirus
Egg yolk antibody
大口黑鲈
Micropterus salmoides
卵黄抗体
间接ELISA
Indirect ELISA
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ISSN2095-0780
DOI10.12131/20230148

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Summary:S943; 大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)是我国大口黑鲈养殖中的常发病原,主要引起大口黑鲈病毒性溃疡病,制约其养殖业的健康发展.为探究卵黄抗体在防控LMBV中的潜在作用,利用LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡,制备了抗LMBV卵黄抗体;通过筛选捕获物浓度、包被条件和封闭条件,建立了抗LMBV卵黄抗体的间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法;使用构建的方法,评估了 LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡后卵黄抗体的效价消减规律.结果表明,1‰(φ)β-丙内酯4℃作用72 h可完全灭活LMBV.间接ELISA反应中,每孔包被105TCID50灭活病毒,37℃孵育2 h后,使用5％(ψ)牛血清白蛋白37℃封闭2h,可有效降低阴性对照组卵黄抗体的背景值;此外,所建立的检测方法与杂交醴弹状病毒卵黄抗体、未免疫的蛋黄提取物和空白细胞不存在交叉反应,特异性较高.LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡约48 d可产生特异性卵黄抗体,免疫后58 d效价升高至峰值(1∶12 800),峰值水平可持续至免疫后128 d.所构建的LMBV卵黄抗体检测方法,可实时监测LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡后的特异性卵黄抗体效价水平的变化规律,确定LMBV卵黄抗体的高效免疫程序及高免蛋收集持续期,为LMBV卵黄抗体产品的开发、应用及LMBV的防治提供了新思路.
ISSN:2095-0780
DOI:10.12131/20230148