嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶TK-PUL保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响

Q814; 对嗜热酸性m型普鲁兰水解酶TK-PUL保守基序中非保守氨基酸残基进行定点突变,通过比较TK-PUL与突变体的酶学性质,确定保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响.TK-PUL保守基序II中I500W位点变化不影响其最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度、热稳定性,但使其a-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性均明显降低.动力学常数测定结果显示,突变体I500W以麦芽三糖为底物的kcat/Km值基本不变,以异潘糖为底物的kcat/Km值约为TK-PUL的64.78％.结果表明,TK-PUL保守基序II中第500位氨基酸残基Ile对其水解糖苷键的偏好性起到重要作用.TK-PUL中I500W...

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Published in食品科学 Vol. 43; no. 22; pp. 113 - 120
Main Authors 曾静, 何础阔, 郭建军, 侯安伟, 聂俊辉, 袁林
Format Magazine Article
LanguageChinese
Published 江西省科学院微生物研究所,江西南昌 330096%海南大学食品科学与工程学院,海南海口 570228 25.11.2022
Subjects
保守基序
定点突变
III型普鲁兰多糖水解酶
同源模建
催化活性
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ISSN1002-6630
DOI10.7506/spkx1002-6630-20211208-093

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Summary:Q814; 对嗜热酸性m型普鲁兰水解酶TK-PUL保守基序中非保守氨基酸残基进行定点突变,通过比较TK-PUL与突变体的酶学性质,确定保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响.TK-PUL保守基序II中I500W位点变化不影响其最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度、热稳定性,但使其a-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性均明显降低.动力学常数测定结果显示,突变体I500W以麦芽三糖为底物的kcat/Km值基本不变,以异潘糖为底物的kcat/Km值约为TK-PUL的64.78％.结果表明,TK-PUL保守基序II中第500位氨基酸残基Ile对其水解糖苷键的偏好性起到重要作用.TK-PUL中I500W位点变化不影响其a-l,4-糖苷键水解活性,但使其α-1,6-糖苷键水解活性明显降低.本研究有助于深入理解TK-PUL的双功能催化机制,也可为TK-PUL的分子改造提供理论依据和设计思路.
ISSN:1002-6630
DOI:10.7506/spkx1002-6630-20211208-093