敲降低密度脂蛋白受体相关蛋白表达对肝癌血管异常化的影响及其机制

• Published in: 中华肿瘤杂志 Vol. 46; no. 5; pp. 399 - 408
• Main Authors: 武强, 詹琳琳, 王宇, 贺钰超, 陈璐, 陈子叶, 李广涛, 刘东明, 包旭, 刘潇濛, 郭华, 宋天强
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津300060%天津医科大学肿瘤医院肿瘤细胞生物学实验室，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津300060%北京清华长庚医院临床转化科学中心，北京102218 23.05.2024
• Subjects: 癌胚抗原; Carcinoembryonic antigen; Angiogenesis; 肝细胞癌; Hepatocellular carcinoma; 低密度脂蛋白受体相关蛋白; 血管生成; Low-density lipoprotein receptor associated protein
• ISSN: 0253-3766
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112152-20230809-00071

目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白（LDLR）表达对肝癌血管异常化的影响及其机制。方法:从Oncomine癌症基因芯片数据库提取87例肝癌组织的基因转录组信息，分析肝癌组织中LDLR的表达水平与癌胚抗原（CEA）和CD31表达水平的相关性。采用短发卡RNA靶基因慢病毒转染的方法，构建LDLR敲降的MHCC-97H和HLE肝癌细胞。通过转录组测序、实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测LDLR敲降后肝癌细胞的差异基因及其表达水平变化。通过富集分析明确LDLR参与的基因相关信号通路。通过对肝癌细胞条件培养基中CEA含量的检测评估LDLR对CEA的影响。采用血管生成实验检测LDLR对人脐静脉内皮细胞血管生成能力的影响，以及CEA在LDLR调控血管生成过程中的作用。收集2019年1月至2022年12月于天津医科大学肿瘤医院手术切除的肝癌组织标本176例，采用免疫组织化学染色检测176例肝癌组织中LDLR及146例肝癌组织中CEA和CD31的表达水平，分析肝癌组织中LDLR的表达水平与肝癌组织中CEA和CD31的表达水平、血清CEA和丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平的相关性。结果:Oncomine数据库分析显示，发生门静脉转移的肝癌患者肝癌组织中LDLR和CEA的表达呈负相关（ r=-0.64， P=0.001），而CEA和CD31的表达呈正相关（ r=0.46， P=0.010）；转录组测序结果显示，LDLR敲降组与对照组MHCC-97H细胞的差异表达基因共有1 032个，其中517个基因表达上调，515个基因表达下调。CEA相关细胞黏附分子5（CEACAM5）在LDLR敲降组细胞中上调明显。基因本体论功能富集分析显示，差异基因最明显富集在血管生成的功能上。京都基因与基因组百科全书信号通路富集分析显示，涉及的相关通路主要包括细胞粘着斑、细胞外基质受体相互作用等。LDLR敲降组条件培养基中CEA含量为43.75±8.43，高于对照组（1.15±0.14， P＜0.001）。血管生成实验结果显示，在5 h，用LDLR敲降组MHCC-97H细胞的条件培养基培养HUVEC细胞形成的血管主结点数、主分段数和网格总面积分别为（295.3±26.4）个、（552.5±63.8）个和（2 239 781.0±138 211.9）平方像素，均高于对照组［分别为（113.3±23.5）个、（194.8±36.5）个和（660 621.0