肿瘤转移相关基因1对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的作用及机制

• Published in: 中华肿瘤杂志 Vol. 44; no. 9; pp. 962 - 967
• Main Authors: 孙芳洲, 王劲松, 李春晓, 王婷, 张竞尧, 周彦彤, 王海娟, 钱海利
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 国家癌症中心 国家肿瘤临床医学研究中心 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室，北京 100021 23.09.2022
• Subjects: Cervical neoplasms; 肿瘤转移相关基因1; 放疗敏感性; MTA1; Radiosensitivity; HeLa cells; 宫颈肿瘤; HeLa细胞
• ISSN: 0253-3766
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112152-20200929-00866

目的:探讨肿瘤转移相关基因1(MTA1)对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的影响及其分子机制。方法:对MTA1敲降的HeLa细胞及对照HeLa细胞进行转录测序，获得差异表达基因并对其进行基因集富集分析和GO聚类分析。采用流式细胞术检测MTA1过表达的HeLa细胞和对照HeLa细胞在10 Gy X射线照射前后的细胞凋亡情况，克隆形成实验和实时无标记动态细胞分析(RTCA)技术检测细胞的增殖情况。选取差异表达基因编码的蛋白构建蛋白相互作用网络，采用免疫荧光实验检测γ－H2AX的表达情况，采用Western blot法检测γ－H2AX、β－CHK2、PARP和cleaved caspase 3的表达水平。结果:转录组测序分析获得差异表达基因649个，其中402个基因在MTA1敲降的HeLa细胞中表达上调，247个基因表达下调。与MTA1相关的差异表达基因富集于DNA损伤修复过程，GO聚类分析提示，DNA损伤修复富集于第2位。流式细胞术检测结果显示，10 Gy X射线照射后，MTA1过表达的HeLa细胞凋亡率[(15.67±0.81)%]低于对照HeLa细胞[(40.27±2.73)%， P<0.001]。RTCA结果显示，过表达MTA1的HeLa细胞经2 Gy X射线照射后，细胞增殖能力高于对照HeLa细胞( P＝0.024)。克隆形成实验显示，过表达MTA1的HeLa细胞经2 Gy X射线照射前后的克隆数分别为(176±7)个和(137±7)个，均高于对照细胞[分别为(134±4)个和(75±4)个，均 P<0.05]。免疫荧光实验结果显示，未经X射线照射的MTA1过表达及对照HeLa细胞中的γ－H2AX几乎无表达，经过10 Gy X射线照射后48 h，对照HeLa细胞中可见明显γ－H2AX表达，且MTA1过表达HeLa细胞中γ－H2AX表达相对较低。Western blot结果显示，10 Gy X射线照射后，过表达MTA1的HeLa细胞中β－CHK2的表达水平(1.04±0.06)高于对照HeLa细胞(0.58±0.25, P＝0.036)，过表达MTA1的HeLa细胞中γ－H2AX、PARP和cleaved caspase 3的表达水平分别为0.52±0.13、0.52±0.22和0.63±0.18，均低于对照HeLa细胞(分别为0.87±0.06，0.78±0.12和0.90±0.12，均 P>0.05)。 结论: