嵌段共聚温敏亲和色谱固定相的制备及其对抗体的分离纯化

O658; 抗体药物在癌症治疗和免疫诊断中起着重要作用,但抗体的分离纯化通常采用酸性洗脱,易导致抗体聚集失活等问题.本研究以硅胶为基质,以温敏嵌段聚合物聚[(N-异丙基丙烯酰胺)-b-4-乙烯基吡啶](P[NIPAM-b-4VP])为间隔臂,以 4-巯基乙基吡啶(MEP)为配基,制备了一种嵌段共聚温敏亲和色谱固定相SiO2-P[NIPAM-b-4VP]-MEP,并以牛血清白蛋白(BSA)和γ-球蛋白为模型蛋白,对制备的温敏亲和色谱固定相的色谱性能进行了表征.分别考察了流动相盐浓度和温度对二者分离性能的影响.结果表明,在 40℃时该固定相只选择性保留γ-球蛋白,而不保留BSA;在5℃时采用含0....

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Published inSepu Vol. 41; no. 12; pp. 1045 - 1051
Main Authors 郭冬梅, 夏一然, Mujeeb ur RAHMAN, 王建忠, 刘家玮, 白泉
Format Journal Article
LanguageChinese
English
Published No. 457, Zhongshan Road, Shahekou District, Dalian City, Liaoning Province 合成与天然功能分子教育部重点实验室,西北大学现代分离科学研究所,陕西省现代分离科学重点实验室,西北大学化学与材料科学学院,陕西 西安 710127 08.12.2023
Editorial board of Chinese Journal of Chromatography
Subjects
a
Communication
affinity chromatography
poly(N-isopropylacrylamide)
抗体分离
温敏色谱
antibody sepa-ration
聚(N-异丙基丙烯酰胺)
4-乙烯基吡啶
temperature-responsive chromatography
亲和色谱
4-vinylpyridine
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ISSN1000-8713
1872-2059
DOI10.3724/SP.J.1123.2023.09028

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Summary:O658; 抗体药物在癌症治疗和免疫诊断中起着重要作用,但抗体的分离纯化通常采用酸性洗脱,易导致抗体聚集失活等问题.本研究以硅胶为基质,以温敏嵌段聚合物聚[(N-异丙基丙烯酰胺)-b-4-乙烯基吡啶](P[NIPAM-b-4VP])为间隔臂,以 4-巯基乙基吡啶(MEP)为配基,制备了一种嵌段共聚温敏亲和色谱固定相SiO2-P[NIPAM-b-4VP]-MEP,并以牛血清白蛋白(BSA)和γ-球蛋白为模型蛋白,对制备的温敏亲和色谱固定相的色谱性能进行了表征.分别考察了流动相盐浓度和温度对二者分离性能的影响.结果表明,在 40℃时该固定相只选择性保留γ-球蛋白,而不保留BSA;在5℃时采用含0.6 mol/L NaCl的Tris-HCl(pH 8.0)缓冲溶液进行洗脱,γ-球蛋白的质量回收率为 92.7%.该固定相对γ-球蛋白的吸附量为(71.5±2.1)mg/g(n=3),是传统温敏亲和色谱固定相SiO2-PNIPAM-MEP的 2 倍.将该固定相用于人血清中IgG的分离纯化,仅通过改变流动相温度和盐浓度即可一步实现对抗体的分离纯化,纯度大于 97.4%±0.7%.上述结果表明该温敏亲和色谱固定相不仅对抗体具有特异的选择性,而且洗脱条件温和,绿色环保,从根本上解决了传统亲和色谱采用酸性洗脱易使抗体蛋白变性失活的难题.该技术在抗体药物的分离纯化和工业生产中具有重要的应用价值.
Bibliography:本文为“第24届全国色谱学术报告会优秀论文专辑”稿件.
ISSN:1000-8713
1872-2059
DOI:10.3724/SP.J.1123.2023.09028