虫草多糖对肿瘤坏死因子α诱导肝细胞凋亡的影响

• Published in: Linchuang gandanbing zazhi Vol. 37; no. 6; pp. 1368 - 1372
• Main Authors: 赵佳男, 彭景华, 刘平, 胡义扬
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: Changchun Journal of Clinical Hepatology 01.06.2021; 上海市中医临床重点实验室,上海201203; 上海中医药大学附属曙光医院临床药理研究所,上海201203; 上海中医药大学肝病研究所,上海201203%上海中医药大学肝病研究所,上海201203; 肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海201203%上海中医药大学肝病研究所,上海201203; 肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海201203
• Subjects: Apoptosis; Cell growth; Protein expression; Proteins; Tumor necrosis factor-TNF; 细胞凋亡; 虫草多糖; 肝硬化
• ISSN: 1001-5256; 2097-3497
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.06.029

目的 探讨虫草多糖对肝细胞凋亡的影响和作用机制。 方法 以人正常肝细胞L02作为研究对象，将不经任何药物处理的人正常肝细胞L02作为正常组；利用不同浓度的TNFα(5、10、20、40 ng/ml)进行干预24 h后筛选肝细胞凋亡模型的造模条件并作为模型组；根据实验设计，使用3种不同浓度的虫草多糖(50、100、200 μg/ml)预作用12 h后给予或者不给予筛选后的TNFα模型浓度24 h作为实验组，收取样本进行检测，采用CCK8法检测细胞增殖活力；采用Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡数；采用RT-PCR法检测细胞凋亡(Bax、caspase3、caspase8、caspase9、死亡受体Fas)的mRNA表达；采用蛋白免疫印迹法检测cleaved-caspase3、cleaved-caspase8蛋白表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验，进一步两两比较采用LSD-t检验或Dunnett-t检验。 结果 CCK8法检测结果显示，40 ng/ml的TNFα诱导L02肝细胞24 h后，L02肝细胞增殖较正常组显著降低(73.54%±14.19% vs 100.00%±23.61%，P＜0.01)，3种不同浓度的虫草多糖在对肝细胞无明显细胞毒性的前提下，较模型组(93.02%±7.21%)，细胞增殖均显著升高(P值均＜0.01)，分别为108.10%±9.05%、114.30%±8.79%、117.70%±9.66%。Annexin V/PI双染法检测结果显示，与正常组细胞凋亡数量比较，模型组细胞凋亡数量显著升高(7.71%±1.20% vs 11.57%±1.41%，P＜0.05)，3种不同浓度的虫草多糖较模型组(18.91%±0.80%)均明显降低细胞凋亡数量，分别为15.16%±0.16%、13.28%±1.57%、16.91%±0.21%(P值均＜0.05)。RT-PCR法和蛋白免疫印迹检测结果显示，40 ng/ml TNFα造模后细胞凋亡相关的Bax、死亡受体Fas的mRNA表达较正常组均增强，差异均有统计学意义(P值均＜0.05)，并且激活形式的cleaved-caspase3、cleaved-caspase8的蛋白表达显著增强(P值均＜0.05)，与模型组比较，50 μg/ml的虫草多糖可显著降低Bax、caspase3、caspase9的mRN