microRNA-223-3p靶向微管相关蛋白1B抑制肝星状细胞活化的机制研究

• Published in: Linchuang gandanbing zazhi Vol. 39; no. 12; pp. 2845 - 2850
• Main Authors: 谢文涛, 鱼康康, 程琦, 李宁
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: Changchun Journal of Clinical Hepatology 01.12.2023; 复旦大学附属华山医院感染科,上海市传染病与生物安全应急响应重点实验室,国家传染病医学中心,上海 200040
• Subjects: MicroRNAs; Protein expression; Proteins; 肝星状细胞; 微小RNAs; Hepatic Stellate Cells; MicroRNAs; 肝纤维化; Microtubule-Associated Proteins; 微管相关蛋白质类; Hepatic Fibrosis
• ISSN: 1001-5256; 2097-3497
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2023.12.015

目的 探讨microRNA-223-3p (miR-223-3p) 对肝星状细胞活化的影响及机制。 方法 选取人肝星状细胞系LX2细胞为研究对象，采用TGF-β刺激LX2细胞的方式构建肝星状细胞活化模型，通过实时荧光定量PCR检测miR-223-3p在肝星状细胞活化过程中表达水平变化；转染miR-223-3p mimic至LX2细胞，通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法 (Western Blot) 及细胞免疫荧光明确miR-223-3p对肝星状细胞活化的调控作用；通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p与靶基因MAP1B的关系；转染MAP1B的siRNA至LX2细胞，通过Western Blot明确抑制MAP1B表达对肝星状细胞活化的影响；转染miR-223-3p至LX2细胞，通过实时荧光定量PCR和Western Blot验证miR-223-3p对MAP1B的调控作用。计量资料两组间比较采用成组t检验。 结果 与静息状态相比，肝星状细胞处于活化状态时，miR-223-3p表达水平下降 (t=9.12，P<0.001) 。过表达miR-223-3p能抑制肝星状细胞活化标志物平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原的mRNA (t值分别为8.35、12.23，P值均<0.01) 和蛋白 (t值分别为16.24、20.90，P值均<0.001) 表达水平。双荧光素酶报告基因实验证实MAP1B是miR-223-3p的潜在靶基因。与对照组相比，过表达miR-223-3p的LX2上MAP1B的mRNA表达 (t=5.95，P<0.01) 及蛋白表达 (t=11.12，P<0.001) 水平均显著降低。 结论 miR-223-3p可通过靶向MAP1B抑制肝星状细胞活化。