口腔がんのスクリーニングに関連するhTERT遺伝子のメチル化検出のための電気化学的ハイブリダイゼーションアッセイ

• Published in: 分析化学 Vol. 66; no. 6; pp. 437 - 443
• Main Authors: 原口, 和也, 冨永, 和宏, 佐藤, しのぶ, 早川, 真奈, 竹中, 繁織
• Format: Journal Article
• Language: Japanese
• Published: 公益社団法人 日本分析化学会 05.06.2017
• ISSN: 0525-1931
• DOI: 10.2116/bunsekikagaku.66.437

テロメラーゼの触媒活性因子であるhuman telomerase reverse transcriptase（hTERT）遺伝子のプロモータ領域のメチル化パターンががんの進行と深くかかわっていることが報告されている．したがってこのプロモータ領域のメチル化パターンが検出できれば，がんの早期発見の手法として発展できると期待される．著者らは，hTERT遺伝子のプロモータ領域中の五つのCpGサイトを含む24塩基をターゲットとし，10種類のプローブDNAを有するマルチ電極チップを作製した．このチップを用いた電気化学的ハイブリダイゼーションアッセイ（Electrochemical hybridization assay, EHA）によってhTERT遺伝子のメチル化パターンによる口腔がん診断を試みた．ここでは，病院での簡易診断を目指して口腔がん，白板症，健常者から得られた口腔ぬぐい液を用いて，ゲノムを採取し，亜硫酸処理したのち，メチル化特異的ポリメラーゼ連鎖反応（Methylation-specific polymerase chain reaction, MSP）を行った．得られたMSP産物をEHAにより評価したところ，サンプルのメチル化頻度とがんの進行度に相関が示された．白板症，健常者を含むすべてのサンプルからメチル化頻度の高いDNAプローブに対する電気シグナルのReceiver Operating Characteristic（ROC）曲線を用いて口腔がんの正診断率を算出したところ，91％ であった．