Real-time PCR 法によるMycoplasma pneumoniae の検出と， そのマクロライド耐性化について
Mycoplasma pneumoniae（M. pneumoniae）は，若年齢者層に気管支炎や肺炎を引き起こす代表的な起因菌の一つである．M. pneumoniae の検出・同定には，抗体を認識する酵素免疫測定法や分離培養法が存在するが，前者では過去の感染による偽陽性，感染直後の偽陰性，後者では培養に時間がかかるなどの問題がある．そこで，我々はreal-time PCR を用いたM. pneumoniae 遺伝子の検出法を構築し，臨床検体からの検出を試みた．また，同時に検出されたM. pneumoniae の薬剤感受性試験およびマクロライド耐性化遺伝子変異についての検索も行った．マイコプラ...
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| Published in | 感染症学雑誌 Vol. 85; no. 6; pp. 652 - 657 |
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| Main Authors | , , , , , , , , |
| Format | Journal Article |
| Language | Japanese |
| Published |
一般社団法人 日本感染症学会
20.11.2011
|
| Online Access | Get full text |
| ISSN | 0387-5911 1884-569X |
| DOI | 10.11150/kansenshogakuzasshi.85.652 |
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| Abstract | Mycoplasma pneumoniae（M. pneumoniae）は，若年齢者層に気管支炎や肺炎を引き起こす代表的な起因菌の一つである．M. pneumoniae の検出・同定には，抗体を認識する酵素免疫測定法や分離培養法が存在するが，前者では過去の感染による偽陽性，感染直後の偽陰性，後者では培養に時間がかかるなどの問題がある．そこで，我々はreal-time PCR を用いたM. pneumoniae 遺伝子の検出法を構築し，臨床検体からの検出を試みた．また，同時に検出されたM. pneumoniae の薬剤感受性試験およびマクロライド耐性化遺伝子変異についての検索も行った．マイコプラズマ肺炎が疑われた275 例のうち，real-time PCR でM. pneumoniae 陽性を示したのは，40 例（14.5％）であった．そのうち培養で陽性を示したのは16 例（5.8％）であった．16 例中，12 例（75％）でA2063G の変異を検出し，残りの4 例では変異を認めなかった．測定した16 株の薬剤感受性試験結果は，clarithromycin に耐性が11 株（MIC：≧64μg/mL），感受性（MIC : 0.0039μg/mL）が 4 株で，clarithromycin 耐性率は75％であった．なお，発育不良が1 株存在した．minocycline とキノロン系抗菌薬にはすべて感受性であった． 以上のように，M. pneumoniae に対する検出はreal-time PCR 法が，培養法よりも検出率が高かった．また，薬剤感受性結果とマクロライド耐性化遺伝子変異検索の結果は一致し，当院におけるM. pneumoniae のマクロライド系抗菌薬耐性率は，75％と高率であった．この原因として市中医療機関においてマクロライド系抗菌薬による治療が遷延し，当院を紹介受診する場合が多いためと考えられた．海外における耐性株検出の報告も増加していることから，マクロライド系抗菌薬を中心に耐性動向を把握することは重要であると考えられた． |
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| AbstractList | Mycoplasma pneumoniae（M. pneumoniae）は，若年齢者層に気管支炎や肺炎を引き起こす代表的な起因菌の一つである．M. pneumoniae の検出・同定には，抗体を認識する酵素免疫測定法や分離培養法が存在するが，前者では過去の感染による偽陽性，感染直後の偽陰性，後者では培養に時間がかかるなどの問題がある．そこで，我々はreal-time PCR を用いたM. pneumoniae 遺伝子の検出法を構築し，臨床検体からの検出を試みた．また，同時に検出されたM. pneumoniae の薬剤感受性試験およびマクロライド耐性化遺伝子変異についての検索も行った．マイコプラズマ肺炎が疑われた275 例のうち，real-time PCR でM. pneumoniae 陽性を示したのは，40 例（14.5％）であった．そのうち培養で陽性を示したのは16 例（5.8％）であった．16 例中，12 例（75％）でA2063G の変異を検出し，残りの4 例では変異を認めなかった．測定した16 株の薬剤感受性試験結果は，clarithromycin に耐性が11 株（MIC：≧64μg/mL），感受性（MIC : 0.0039μg/mL）が 4 株で，clarithromycin 耐性率は75％であった．なお，発育不良が1 株存在した．minocycline とキノロン系抗菌薬にはすべて感受性であった． 以上のように，M. pneumoniae に対する検出はreal-time PCR 法が，培養法よりも検出率が高かった．また，薬剤感受性結果とマクロライド耐性化遺伝子変異検索の結果は一致し，当院におけるM. pneumoniae のマクロライド系抗菌薬耐性率は，75％と高率であった．この原因として市中医療機関においてマクロライド系抗菌薬による治療が遷延し，当院を紹介受診する場合が多いためと考えられた．海外における耐性株検出の報告も増加していることから，マクロライド系抗菌薬を中心に耐性動向を把握することは重要であると考えられた． |
| Author | 高橋, 伯夫 小池, 千裕 中村, 竜也 奥田, 和之 藤本, 弘子 蓮井, 正史 中田, 千代 大倉, ひろ枝 乾, 佐知子 |
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| DOI | 10.11150/kansenshogakuzasshi.85.652 |
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| PublicationDecade | 2010 |
| PublicationTitle | 感染症学雑誌 |
| PublicationTitleAlternate | 感染症誌 |
| PublicationYear | 2011 |
| Publisher | 一般社団法人 日本感染症学会 |
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| References | 14) Pereyre S, Charron A, Renaudin H, Bebear C,Bebear CM：First report of macrolide-resistant strains and description of a novel nucleotide sequence variation in the P1 adhesin gene in Mycoplasma pneumoniae clinical strains isolated in France over 12 years. J Clin Microbiol 2007；45 （11）：3534―9. 4) Morozumi M, Hasegawa K, Kobayashi R, Inoue N, Iwata S, Kuroki H, et al.：Emergence of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae with a 23S rRNA gene mutation. Antimicrob Agents Chemother 2005；49（6）：2302―6. 17) Lui Y, Ye X, Zhang H, Xu X, Li W, Zhu D, et al.：Antimicrobial susceptibility of Mycoplasma pneumoniae isolates and molecular analysis of macrolide-resistant strains from Shanghai, China. Antimicrob Agents Chemother 2009；53 （5）：2160―2. 3) Morozumi M, Iwata S, Hasegawa K, Chiba N,Takayanagi R, Matsubara K, et al.：Increased macrolide resistance of Mycoplasma pneumoniae in pediatric patients with community-acquired pneumonia. Antimicrob Agents Chemother 2008；52（1）：348―50. 8) Suzuki S, Yamazaki T, Narita M, Okazaki N,Suzuki I, Andoh T, et al.：Clinical evaluation of macrolide-resistant Mycoplasma pneumonia. Antimicrob Agents Chemother 2006；50（2）：709―12. 12) 成田光生：薬剤耐性マイコプラズマの現状と今後の展望．モダンメディア2007；54：297―306. 7) Raggam RB, Leitner E, Berg J, Muhlbauer G,Marth E, Kessler HH：Single-run, parallel de tection of DNA from three pneumoniaproducing bacteria by real-time polymerase chain reaction. J. Mol. Diagn 2005；7：133―8. 2) Okazaki N, Narita M, Yamada S, Izumikawa K,Umetsu M, Kenri T, et al.：Characteristics of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae strains isolated from patients and induced with erythromycin in vitro. Microbiol Immunol 2001；45（8）：617―20. 10) 成田光生：小児のマイコプラズマ肺炎．感染と抗菌薬2004；7：281―6. 15) Wolff BJ, Thacker WL, Schwartz SB, Winchell JM：Detection of macrolide resistance in Mycoplasma pneumoniae by real-time PCR and highresolution melt analysis. Antimicrob Agents Chemother 2008；52（10）：3542―9. 13) Critchley IA, Jones ME, Heinze PD, Hubbard D,Engler HD, Evangelista AT, et al.：In vitro ac tivity of levofloxacin against contemporary clinical isolates of Legionella pneumophila, Mycoplasma pneumoniae and Chlamydia pneumoniae from North America and Europe. Clin Microbiol In fect 2002；8（4）：214―21. 16) Xin D, Mi Z, Han X, Qin L, Li J, Wei T, et al.：Molecular mechanisms of macrolide resistance in clinical isolates of Mycoplasma pneumoniae from China. Antimicrob Agents Chemother 2009；53（5）：2158―9. 11) Lucier TS, Jaffe A, Dixon G：Immunomodulatory effects of macrolide antibiotics in respira tory disease : therapeutic implications for asthma and cystic fibrosis. Paediatr Drugs 2007；9（2）：107―18. 5) Matsuoka M, Narita M, Okazaki N, Ohya H,Yamazaki T, Ouchi K, et al.：Characterization and molecular analysis of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae clinical isolates obtained in Japan. Antimicrob Agents Chemother 2004；48（12）：4624―30. 6) Lucier TS, Heitzman K, Liu SK, Hu PC：Transition mutations in the 23 S rRNA of erythromycin-resistant isolates of Mycoplasma pneumonia. Antimicrob Agents Chemother 1995；39（12）：2770―3. 1) 成田光生，富樫武弘：小児マイコプラズマ感染症診断における迅速診断キットの有用性．感染症誌2003；77：310―5. 9) Matsubara K, Morozumi M, Okada T, Matsushima T, Komiyama O, Shoji M, et al.：A comparative clinical study of macrolide-sensitive and macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae infections in pediatric patients. J Infect Chemother 2009 Dec ; 15（6）：380―3. |
| References_xml | – reference: 12) 成田光生：薬剤耐性マイコプラズマの現状と今後の展望．モダンメディア2007；54：297―306. – reference: 2) Okazaki N, Narita M, Yamada S, Izumikawa K,Umetsu M, Kenri T, et al.：Characteristics of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae strains isolated from patients and induced with erythromycin in vitro. Microbiol Immunol 2001；45（8）：617―20. – reference: 7) Raggam RB, Leitner E, Berg J, Muhlbauer G,Marth E, Kessler HH：Single-run, parallel de tection of DNA from three pneumoniaproducing bacteria by real-time polymerase chain reaction. J. Mol. Diagn 2005；7：133―8. – reference: 16) Xin D, Mi Z, Han X, Qin L, Li J, Wei T, et al.：Molecular mechanisms of macrolide resistance in clinical isolates of Mycoplasma pneumoniae from China. Antimicrob Agents Chemother 2009；53（5）：2158―9. – reference: 15) Wolff BJ, Thacker WL, Schwartz SB, Winchell JM：Detection of macrolide resistance in Mycoplasma pneumoniae by real-time PCR and highresolution melt analysis. Antimicrob Agents Chemother 2008；52（10）：3542―9. – reference: 14) Pereyre S, Charron A, Renaudin H, Bebear C,Bebear CM：First report of macrolide-resistant strains and description of a novel nucleotide sequence variation in the P1 adhesin gene in Mycoplasma pneumoniae clinical strains isolated in France over 12 years. J Clin Microbiol 2007；45 （11）：3534―9. – reference: 5) Matsuoka M, Narita M, Okazaki N, Ohya H,Yamazaki T, Ouchi K, et al.：Characterization and molecular analysis of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae clinical isolates obtained in Japan. Antimicrob Agents Chemother 2004；48（12）：4624―30. – reference: 6) Lucier TS, Heitzman K, Liu SK, Hu PC：Transition mutations in the 23 S rRNA of erythromycin-resistant isolates of Mycoplasma pneumonia. Antimicrob Agents Chemother 1995；39（12）：2770―3. – reference: 9) Matsubara K, Morozumi M, Okada T, Matsushima T, Komiyama O, Shoji M, et al.：A comparative clinical study of macrolide-sensitive and macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae infections in pediatric patients. J Infect Chemother 2009 Dec ; 15（6）：380―3. – reference: 10) 成田光生：小児のマイコプラズマ肺炎．感染と抗菌薬2004；7：281―6. – reference: 11) Lucier TS, Jaffe A, Dixon G：Immunomodulatory effects of macrolide antibiotics in respira tory disease : therapeutic implications for asthma and cystic fibrosis. Paediatr Drugs 2007；9（2）：107―18. – reference: 13) Critchley IA, Jones ME, Heinze PD, Hubbard D,Engler HD, Evangelista AT, et al.：In vitro ac tivity of levofloxacin against contemporary clinical isolates of Legionella pneumophila, Mycoplasma pneumoniae and Chlamydia pneumoniae from North America and Europe. Clin Microbiol In fect 2002；8（4）：214―21. – reference: 3) Morozumi M, Iwata S, Hasegawa K, Chiba N,Takayanagi R, Matsubara K, et al.：Increased macrolide resistance of Mycoplasma pneumoniae in pediatric patients with community-acquired pneumonia. Antimicrob Agents Chemother 2008；52（1）：348―50. – reference: 17) Lui Y, Ye X, Zhang H, Xu X, Li W, Zhu D, et al.：Antimicrobial susceptibility of Mycoplasma pneumoniae isolates and molecular analysis of macrolide-resistant strains from Shanghai, China. Antimicrob Agents Chemother 2009；53 （5）：2160―2. – reference: 1) 成田光生，富樫武弘：小児マイコプラズマ感染症診断における迅速診断キットの有用性．感染症誌2003；77：310―5. – reference: 8) Suzuki S, Yamazaki T, Narita M, Okazaki N,Suzuki I, Andoh T, et al.：Clinical evaluation of macrolide-resistant Mycoplasma pneumonia. Antimicrob Agents Chemother 2006；50（2）：709―12. – reference: 4) Morozumi M, Hasegawa K, Kobayashi R, Inoue N, Iwata S, Kuroki H, et al.：Emergence of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae with a 23S rRNA gene mutation. Antimicrob Agents Chemother 2005；49（6）：2302―6. |
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| ispartofPNX | 感染症学雑誌, 2011/11/20, Vol.85(6), pp.652-657 |
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