环状RNA circ_0120051通过miR-144-3p/IDH2轴抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型研究

• Published in: Zhongshan da xue xue bao. Zhongshan daxue xuebao yixue kexue ban = Journal of Sun Yat-sen University. Yi xue ke xue ban Vol. 45; no. 2; pp. 196 - 205
• Main Authors: 梁俣, 胡志琴, 温艺红, 伍华燕, 王娅, 刘宇鹏, 单志新, 方咸宏
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 广东省心血管病研究所//南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院 广东 广州 510080%广州医科大学附属第五医院药学部, 广东 广州 510799%华南理工大学医学院,广东 广州 510006%广东省临床药理学重点实验室//南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院 广东广州 510080 01.03.2024; Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
• Subjects: Circ_0120051; 微RNA; 心肌成纤维细胞; 心肌纤维化; 环状RNA; 心肌纤维化; Circ_0120051; cardiac fibrosis; circular RNA; cardiac fibroblast; 微RNA; 环状RNA; miRNA; 心肌成纤维细胞
• ISSN: 1672-3554
• DOI: 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).20240305.004

R363.2; [目的]研究环形 RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制.[方法]通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中 circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平.核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验鉴定circ_0120051的RNA稳定性.RT-qPCR检测circ_0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况.利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circ_0120051,通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ_0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响,利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响.通过RNA免疫共沉淀技术(RIP)验证circ_0120051与miR-144-3p间的结合作用,利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2(Idh2)3'-UTR的结合位点.[结果]Circ_0120051在心衰病人心肌中表达显著增加,而其宿主基因SLC8A1表达无显著差异.Circ_0120051主要定位于人心肌细胞的胞质中.RNase R消化实验证实circ_0120051相对于线性SLC8A1 mRNA具有典型的环状RNA稳定性.过表达circ_0120051可抑制mCFs中纤维化相关基因表达和mCFs的迁移能力.RIP实验证实circ_0120051与miR-144-3p之间具有明显结合作用.在mCFs中转染miR-144-3p可促进纤维化相关基因的表达,并有效逆转circ_0120051对mCFs纤维化表型的抑制作用.双萤光素酶报告基因实验证实miR-144-3p与Idh2的3'-UTR存在结合作用.miR-144-3p可在转录水平抑制mCFs中Idh2表达,而过表达circ_0120051可增加mCFs中IDH2表达.在mCFs中转染miR-144-3p和Idh2的小干扰RNA(siRNA),可一致性地逆转circ_0120051对纤维化相关基因表达和mCFs迁移的抑制作用.[结论]Circ_0120051通过特异结合miR-144-3p并增加其靶基因IDH2表达来发挥抑制mCFs纤维化表型的作用.