靶序列富集多重PCR结合DHPLC同时检测5种食源性致病菌

• Published in: 食品安全质量检测学报 no. 6; pp. 2275 - 2282
• Main Author: 刘忠梅 曾繁华 罗佳 徐义刚 曲敏 莫春生 刘新亮 李苏龙
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 黑龙江出入境检验检疫局,哈尔滨,150001%大连出入境检验检疫局,大连,116600%辽宁出入境检验检疫局,大连,116001%哈尔滨商业大学,哈尔滨,150076 2015
• Subjects: 单核细胞增生李斯特氏菌; 变性高效液相色谱; 大肠埃希氏菌O157; 志贺氏菌; 沙门氏菌; 金黄色葡萄球菌; 靶序列富集多重PCR; 变性高效液相色谱; Salmonella; 金黄色葡萄球菌; Listeria monocytogenes; target enriched multiplex PCR; Escherichia coli O157; 志贺氏菌; 沙门氏菌; 靶序列富集多重PCR; 单核细胞增生李斯特氏菌; 大肠埃希氏菌O157; Staphylococcus aureus; Shigella; denaturing high-performance liquid chromatography
• ISSN: 2095-0381

目的建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌5种食源性致病菌的简便、灵敏的高通量方法。方法根据GenBank公布的5种致病菌的特异性靶基因序列,设计5对特异性引物,与通用引物连接构成复合引物。经过反应条件的优化,建立了5种致病菌的靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)扩增方法,扩增产物采用变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术进行检测。结果采用Tem-PCR-DHPLC方法,检测48株试验菌株,未发现非特异性结果。对5种致病菌检测灵敏度,除金黄色葡萄球菌为620 cfu/mL外,其余都小于100 cfu/mL。对4种样品的检测结果与国家标准方法相符合。结论 Tem-PCR-DHPLC检测方法,相比传统多重PCR方法,能有效地解决引物扩增效率不均衡的问题,不需优化引物浓度,方法特异性强,灵敏度高,具有较好的实用性。