牛奶样品布氏杆菌套式PCR检测方法的建立

为建立从奶品中监控布氏杆菌感染的方法，根据牛布氏杆菌omp25、omp31和16S rRNA基因序列设计内、外向引物，优化牛奶样品中布氏杆菌基因组DNA提取方法，建立牛奶样品布氏杆菌套式PCR方法．结果显示，使用人工合成的两对F4／R2和F2D／R1U套式引物，通过两次扩增，可有效扩增出牛奶中污染布氏杆菌的16S rRNA的特异性DNA片段，其对牛奶样品中布氏杆菌检测下限达3．3CFU·mL^-1．该套式PCR与大肠杆菌、溶血性链球菌、沙门氏菌、克雷伯氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和螺旋杆菌等相关细菌DNA无交叉反应，显示高度的布氏杆菌特异性，其与布氏杆菌分离鉴定的符合率达100％．本试验建...

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Published inZhejiang daxue xue bao. Journal of Zhejiang University. Agriculture and life sciences. Nong ye yu sheng ming ke xue ban Vol. 34; no. 2; pp. 169 - 174
Main Author 杜振昆 郭军庆 张妙仙 项玉燕 周继勇
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 浙江大学动物预防医学研究所,浙江,杭州,310029 2008
新疆农业大学动物医学学院,新疆,乌鲁木齐,830052%浙江大学动物预防医学研究所,浙江,杭州,310029%金华市畜牧兽医局,浙江,金华,321017
Subjects
套式PCR
布氏杆菌
牛奶
布氏杆菌
牛奶
套式PCR
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ISSN1008-9209
DOI10.3785/j.issn.1008-9209.2008.02.008

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Summary:为建立从奶品中监控布氏杆菌感染的方法，根据牛布氏杆菌omp25、omp31和16S rRNA基因序列设计内、外向引物，优化牛奶样品中布氏杆菌基因组DNA提取方法，建立牛奶样品布氏杆菌套式PCR方法．结果显示，使用人工合成的两对F4／R2和F2D／R1U套式引物，通过两次扩增，可有效扩增出牛奶中污染布氏杆菌的16S rRNA的特异性DNA片段，其对牛奶样品中布氏杆菌检测下限达3．3CFU·mL^-1．该套式PCR与大肠杆菌、溶血性链球菌、沙门氏菌、克雷伯氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和螺旋杆菌等相关细菌DNA无交叉反应，显示高度的布氏杆菌特异性，其与布氏杆菌分离鉴定的符合率达100％．本试验建立的布氏杆菌套式PCR检测方法具有较好的特异性和敏感性，适用于牛奶样品中布氏杆菌的实验室快速检测．
Bibliography:Q93-332
nested-PCR
S852.61
Brucella
Brucella; nested-PCR; milk
milk
33-1247/S
ISSN:1008-9209
DOI:10.3785/j.issn.1008-9209.2008.02.008