通过重叠PCR构建2个增强型植物花特异双向启动子

基于植物基因工程要求精确调控的目标，为转基因提供更多可供选择的启动子，使用重叠延伸PCR的方法设计并人工构建了2个增强型植物花特异双向启动子pPCHS-35S enhancer-pLCHS和pPCHS-OCS enhanceFpLCHS．实验中，用本实验室保存的矮牵牛花特异启动子核心序列pPCHS、百合花特异启动子核心序列pLCHS、CaMV35S增强子序列（35Senhancer）、OCS增强予序列（OCSenhancer）为模板，根据重叠延伸PCR原理，设计并合成了10条引物，进行两轮PCR，产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定，成功拼接出了与设计的双向启动子大小一致的2段序列．使用DAN回收试剂盒回...

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Published in浙江大学学报（农业与生命科学版） Vol. 39; no. 1; pp. 34 - 41
Main Author 张雄飞 刘雅莉 娄倩 祁银燕 杜灵娟
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室/农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室,陕西杨凌712100 2013
西北农林科技大学林学院,陕西杨凌712100%西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室/农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室,陕西杨凌712100
西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100
Subjects
启动子
增强子
重叠延伸PCR
增强子
重叠延伸PCR
启动子
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ISSN1008-9209
DOI10.3785/j.issn.1008-9209.2011.12.011

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Summary:基于植物基因工程要求精确调控的目标，为转基因提供更多可供选择的启动子，使用重叠延伸PCR的方法设计并人工构建了2个增强型植物花特异双向启动子pPCHS-35S enhancer-pLCHS和pPCHS-OCS enhanceFpLCHS．实验中，用本实验室保存的矮牵牛花特异启动子核心序列pPCHS、百合花特异启动子核心序列pLCHS、CaMV35S增强子序列（35Senhancer）、OCS增强予序列（OCSenhancer）为模板，根据重叠延伸PCR原理，设计并合成了10条引物，进行两轮PCR，产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定，成功拼接出了与设计的双向启动子大小一致的2段序列．使用DAN回收试剂盒回收两段序列，克隆到pGEM-TEasy载体中并导入大肠埃希菌TOP10进行扩繁和保存，扩繁茵液进行测序分析，测序证实得到的两段序列与设计的双向启动子序列完全一致，成功获得2个增强型植物花特异双向启动子本研究的结果能为今后利用多基因共转化的方法精确调控矮牵牛、百合等重要花卉的观赏性状提供有用的启动子．
Bibliography:Summary Promoter is a key element on gene expression regulation, and it is an emphasis of plant transgenic research. Now, detailed analysis about flower-specific promoters such as ehalcone synthase gene promoter from petunia and lily has been made. Enhancer is another kind of regulatory element usually placed at upstream of promoter sequence. In order to precisely regulate gene expression in plant genetic engineering, scientists put forward a method of designing artificial promoter to avoid homology dependent gene silencing caused by repeatedly using a same promoter sequence. In addition, in order to decrease the size of foreign gene and conform to the trend of multiple genes transformation, the method of using bidirectional promoter was proposed by scientists. According tothe previous studies, the present study use core sequence of petunia flower-specific promoter pPCHS and lily flower- specific promoter pLCHS, CaMV 35S enhance sequence, OCS enhance sequence to design and construct two enhanced plant flower-
ISSN:1008-9209
DOI:10.3785/j.issn.1008-9209.2011.12.011