肿瘤特异性Survivin启动子驱动的FAK shRNA真核表达载体的构建

• Published in: 西安交通大学学报（医学版） Vol. 33; no. 5; pp. 533 - 538
• Main Author: 孙昊 韩少山 周振宇 宋涛 刘青光
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科,陕西西安,710061 2012
• Subjects: FAK; RNA干扰; shRNA; Survivin启动子; 肝癌; RNA干扰; Survivin启动子; FAK shRNA; 肝癌
• ISSN: 1671-8259
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2012.05.002

目的构建肿瘤特异性Survivin启动子驱动的FAK shRNA真核表达载体。方法 PCR扩增Survivin启动子,构建重组载体pGEMT/pSurv并酶切、测序鉴定。体外化学合成编码FAK shRNA寡核苷酸链并退火互补成双链,构建真核表达载体pGenesil-FAK shRNA并酶切、测序鉴定。用Survivin启动子替换pGenesil-FAK shRNA中的U6启动子,重组为Survivin启动子驱动的FAK shRNA真核表达载体pGenesil-pSurv-FAK shRNA。将pGenesil-pSurv-FAK shRNA转染至肝癌细胞系HepG2,观察转染效率。48h后应用RT-PCR法检测转染重组质粒后HepG2细胞中FAK mRNA的表达变化。结果成功构建了肿瘤特异性Survivin启动子驱动的真核表达载体pGenesil-pSur-FAKshRNA,转染至肝癌细胞HepG2后可明显下调HepG2细胞中FAK mRNA表达水平。结论以Survivin启动子驱动的FAK shRNA真核表达载体能够有效下调肝癌细胞FAK的表达,为进一步以靶向干扰FAK表达为主要手段的肝癌联合治疗提供实验依...