小鼠锰超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的表达和纯化

为构建小鼠锰超氧化物歧化酶（SOD）的原核表达载体，在大肠杆菌中进行蛋白表达、纯化和功能检测，以小鼠肝脏cDNA为模板，利用PCR方法克隆小鼠锰SOD基因，PCR扩增了1个长600bp左右的基因片段，该片段编码由198个氨基酸组成的成熟的小鼠锰SOD蛋白．将其插入pETl5b载体中，经测序鉴定正确后，将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta—gami．含有pET15b-mMn—SOD质粒的工程菌经过IPTG诱导能表达出相对分子质量约25000的目的蛋白，超声破碎菌体，经Ni—NTA纯化后得到纯度约为95％的重组mMn—SOD蛋白．SOD活性检测表明经过诱导表达的mMn—SOD比活力为531．7U／...

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Published inHua nan nong ye da xue xue bao Vol. 31; no. 3; pp. 85 - 89
Main Author 王峰 黄璐圆
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 暨南大学,药学院,广东广州510632 2010
暨南大学中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室,广东广州510632%中国科学院,广州生物医药与健康研究院分子医学中心,广东广州510633
Subjects
SOD活性
纯化
表达
锰超氧化物歧化酶
SOD活性
锰超氧化物歧化酶
纯化
表达
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ISSN1001-411X
DOI10.3969/j.issn.1001-411X.2010.03.021

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Summary:为构建小鼠锰超氧化物歧化酶（SOD）的原核表达载体，在大肠杆菌中进行蛋白表达、纯化和功能检测，以小鼠肝脏cDNA为模板，利用PCR方法克隆小鼠锰SOD基因，PCR扩增了1个长600bp左右的基因片段，该片段编码由198个氨基酸组成的成熟的小鼠锰SOD蛋白．将其插入pETl5b载体中，经测序鉴定正确后，将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta—gami．含有pET15b-mMn—SOD质粒的工程菌经过IPTG诱导能表达出相对分子质量约25000的目的蛋白，超声破碎菌体，经Ni—NTA纯化后得到纯度约为95％的重组mMn—SOD蛋白．SOD活性检测表明经过诱导表达的mMn—SOD比活力为531．7U／mg．
Bibliography:SOD activity
manganese superoxide dismutase ; expression ; purification ; SOD activity
expression
44-1110/S
Q78
purification
manganese superoxide dismutase
ISSN:1001-411X
DOI:10.3969/j.issn.1001-411X.2010.03.021