siRNA靶向Her-2逆转录病毒载体构建及其在SKOV3中的表达

R737.31%Q343; 目的 构建并鉴定Her-2特异性siRNA逆转录病毒载体,将其导入SKOV3卵巢癌细胞中,并初步筛选有效抑制Her-2表达的细胞株.方法 体外合成含针对Her-2特异基因序列的寡核苷酸并定向克隆入逆转录病毒载体RNAi-Ready pSIREN-RetroQ,构建的载体通过测序、酶切鉴定后,脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选并挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染SKOV3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her-2表达的SKOV3细胞株,并分别通过RT-PCR和免疫组化方法鉴定抑制Her-2表达的效果.结果 成功构建了重组逆转录病毒载体,转...

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Published in肿瘤防治研究 Vol. 34; no. 4; pp. 277 - 318
Main Authors 周颖, 凌斌, 高婷, 陈敏, 冯定庆, 程志祥, 朱园园, 赵卫东, 石永云, 王梅梅, 祝怀平
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 230001,安徽省分子医学重点实验室,安徽医科大学附属省立医院分子医学临床研究中心 2007
Subjects
RNA干扰
Her-2
逆转录病毒载体
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ISSN1000-8578
DOI10.3971/j.issn.1000-8578.2007.04.013

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Summary:R737.31%Q343; 目的 构建并鉴定Her-2特异性siRNA逆转录病毒载体,将其导入SKOV3卵巢癌细胞中,并初步筛选有效抑制Her-2表达的细胞株.方法 体外合成含针对Her-2特异基因序列的寡核苷酸并定向克隆入逆转录病毒载体RNAi-Ready pSIREN-RetroQ,构建的载体通过测序、酶切鉴定后,脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选并挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染SKOV3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her-2表达的SKOV3细胞株,并分别通过RT-PCR和免疫组化方法鉴定抑制Her-2表达的效果.结果 成功构建了重组逆转录病毒载体,转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了SKOV3, 并且抑制了Her-2的表达.结论 抑制Her-2表达的SKOV3细胞株的建立,为观察转染siRNA的逆转录病毒表达载体的肿瘤细胞恶性生物学行为变化奠定了实验基础.
ISSN:1000-8578
DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2007.04.013