Raf全长及氨基端、羧基端真核表达载体的构建和表达

• Published in: Zhongguo fei ai za zhi Vol. 11; no. 3; pp. 306 - 310
• Main Author: 王卓敏 陈军 万海粟 刘红雨 朱文 肖文 范羽 李永文 孙丽亚 周清华
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 300052,天津,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津医市肺癌研究所,天津医科大学总医院 2008; 四川大学华西医院肺癌分子生物学重点实验室,成都,610041%天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津市肺癌研究所,天津医科大学总医院,天津,300052%610041,成都,四川大学华西医院肺癌分子生物学重点实验室
• Subjects: Raf; 基因重组; 真核表达; 真核表达; Raf; 基因重组
• ISSN: 1009-3419
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2008.03.001

背景与目的Raf是Ras—Raf—MEK—ERK信号转导通路中的关键分子，在多种人类肿瘤中存在高度活化，然而其生物学功能和详细调节机理目前尚未完全明了。本研究旨在构建人Raf基因全长（Raf-1），氨基端（N—Raf）及羧基端（C—Raf）真核表达载体，并观察其在293T细胞中的表达情况。方法通过PCR方法扩增Raf-1，N—Raf和C—RgH的片段，利用基因重组技术构建pCMV-Tag2b—Raf-1，pCMV—Tag2b—N—Raf和pCMV-Tag2b—C—R填核表达载体，并进行酶切和测序鉴定。鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞，Westem blot检测目的蛋白的表达。结果酶切和测序结果均证实pCMV-Tag2b—Raf-1，pCMV-Tag2b—N—Raf和pCMV-Tag2b—C—Raf真核表达载体的序列和编码框均正确无误，转染后的293T细胞经Western Blot检测可正确表达目的蛋白。结论本研究成功构建了pCMV-Tag2b—Raf-1，pCMV—Tag2b—N—Raf和pCMV-Tag2b—C—Raf真核表达载体并可在293T细胞中表达，为今后进一步研究Raf基因的生物学机理奠定了基础。