蛋白质INSM1中的锌指结构域ZF(4-5)的表达、纯化与表征

胰岛素瘤相关蛋白1（INSM1）是一类转录调节蛋白，通过其C-端的锌指结构域（氨基酸250-510）来识别序列特异性的DNA分子．INSM1的C-端包含有5个串联的锌指结构域，然而这些结构域的结构及其如何识别DNA的分子机制目前仍不清楚．通过重组构建的质粒pET-32m-INSM1(424-497)表达的蛋白质（氨基酸424-497）包含了最后两个锌指结构域4和5，简称为ZF(4-5)．该文详细研究了蛋白质ZF(4-5)的诱导表达条件，得到了较高产率的纯化蛋白．核磁共振（NMR）谱和圆二色谱（CD）揭示了Zn2+对稳定锌指蛋白结构的必要性，以及C2H2-Zn2+结合的组氨酸呈现为.-异构方式．...

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Published in波谱学杂志 Vol. 34; no. 1; pp. 1 - 7
Main Author 王华谱;朱勤俊;刘买利;杨运煌;岳霞丽
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 波谱与原子分子物理国家重点实验室,武汉磁共振中心(中国科学院 武汉物理与数学研究所),湖北 武汉 430071%波谱与原子分子物理国家重点实验室,武汉磁共振中心(中国科学院 武汉物理与数学研究所),湖北 武汉 430071%华中农业大学 理学院,湖北 武汉,430070 2017
华中农业大学 理学院,湖北 武汉 430070
Subjects
液体核磁共振(solutionNMR);锌指蛋白;表达与纯化;结构与功能
液体核磁共振(solutionNMR)
structure and function
结构与功能
锌指蛋白
zinc finger domain
solution NMR
表达与纯化
protein expression and purification
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ISSN1000-4556
DOI10.11938/cjmr20170101

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Summary:胰岛素瘤相关蛋白1（INSM1）是一类转录调节蛋白，通过其C-端的锌指结构域（氨基酸250-510）来识别序列特异性的DNA分子．INSM1的C-端包含有5个串联的锌指结构域，然而这些结构域的结构及其如何识别DNA的分子机制目前仍不清楚．通过重组构建的质粒pET-32m-INSM1(424-497)表达的蛋白质（氨基酸424-497）包含了最后两个锌指结构域4和5，简称为ZF(4-5)．该文详细研究了蛋白质ZF(4-5)的诱导表达条件，得到了较高产率的纯化蛋白．核磁共振（NMR）谱和圆二色谱（CD）揭示了Zn2+对稳定锌指蛋白结构的必要性，以及C2H2-Zn2+结合的组氨酸呈现为.-异构方式．
Bibliography:42-1180/O4
solution NMR;zinc finger domain;protein expression and purification; structure and function
Human insulinoma-associated protein 1 (INSM1) is a transcriptional regulator recognizing sequence-specific DNA through its C-terminal zinc finger (ZF) domains. INSM1 contains five zinc finger domains, whose structures are still not known; therefore, the mechanisms through which it recognizes DNA also remain unclear. In this study, we designed the recombinant plasmid pET-32m-INSM1(424-497), which can express the truncated INSM1 fragment containing the zinc finger domains 4 and 5 [i.e., ZF(4-5)]. Expression and purification of ZF(4-5) were explored in order to achieve high protein yield for further structural and functional study. Nuclear magnetic resonance (NMR) and circular dichroism (CD)spectra revealed that chelation of Zn2+ to C2H2 in the ZF(4-5) was important for its structural stability, and also confirmed that the active-sites, Zn2+-chelated histidines, had the ? -tautomeric form.
ISSN:1000-4556
DOI:10.11938/cjmr20170101