Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA

【目的】建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法，为进行后续的分子生物学研究奠定基础。【方法】采用Trizol试剂法，通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数，对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化。【结果】与吸取0．4mL上清液相比，吸取0．2mL上清液的总RNAOD260／OD280／OD230分别在1．95-2．00和2．11～2．44，所获得的总RNA纯度较高。沉淀漂洗两次的OD260/OD230值（2．11～2．47）明显高于沉淀漂洗1次的，RNAOD260/OD230（1．01～1．61），总RNA纯度较高。经异丙醇沉淀所得的各材料的...

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Published in南方农业学报 Vol. 43; no. 12; pp. 1934 - 1939
Main Author 吴凯朝 黄诚梅 李杨瑞 杨丽涛 吴建明
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁530007%广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁,530007%广西大学/广西亚热带生物资源保护和利用重点实验室,南宁530005 2012
广西大学/广西亚热带生物资源保护和利用重点实验室,南宁530005
中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁530007%中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁,530007
中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁530007
Subjects
RNA
Trizol腻剂法
改良Trizol一异丙醇法
水稻
玉米
甘蔗
Trizol试剂法
甘蔗
水稻
RNA
玉米
改良Trizol-异丙醇法
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ISSN2095-1191
DOI10.3969/j:issn.2095-1191.2012.12.1934

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Summary:【目的】建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法，为进行后续的分子生物学研究奠定基础。【方法】采用Trizol试剂法，通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数，对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化。【结果】与吸取0．4mL上清液相比，吸取0．2mL上清液的总RNAOD260／OD280／OD230分别在1．95-2．00和2．11～2．44，所获得的总RNA纯度较高。沉淀漂洗两次的OD260/OD230值（2．11～2．47）明显高于沉淀漂洗1次的，RNAOD260/OD230（1．01～1．61），总RNA纯度较高。经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA28S、18S和5S谱带清晰，无拖尾现象，总RNA完整性较好；LiC1沉淀法的RNA条带较模糊粘连，5S条带明显弥散，总RNA产率相对较低。以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增，所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强，无特异扩增，目的片段长度为153bp。【结论】改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高，适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA。
Bibliography:45-1381/S
[Objective]The present study was conducted to establish a fast and effectively method for isolating the to- tal RNA in gramineous crops in order to provide foundation for subsequent molecular biology researches. [Method]Using the Trizol reagent method, the supernatant amount changed. Then, by the precipitation method and precipitation rinse times, the total RNA extraction from the leaves, stem tips, and roots of sugarcane, maize, and rice was optimized. [Result] Compared with the 0.4 mL supernatant absorbent, the 0.2 mL supernatant absorbent＇s total RNA OD260/OD280 and OD260/OD230 values were between 1.95-2.00 and 2.l 1-2.44 respectively, in which the total RNA obtained was highly puri- fied. The total RNA OD260/OD230 value （2.11-2.47） that underwent precipitation rinse two times was significantly higher than the total RNA OD260/OD230 value （1.01-1.61） that underwent precipitation rinse 1 time, so the total RNA of the higher OD~0/OD~ value was purer. The spectra of total RNA 28S, 185, and 5S resulted
ISSN:2095-1191
DOI:10.3969/j:issn.2095-1191.2012.12.1934