PGC-1α辅助激活人PEPCK基因转录

【目的】构建人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因启动子荧光素酶报告质粒PGL3-hPCK-luc，并探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ辅助激活因子1α(PGC-1α)在转录因子肝细胞核因子4α(HNF4α)介导下对人PEPCK基因启动子活性的影响【方法】从人全血基因组DNA中克隆PEPCK启动子基因片段，并重组进荧光素酶报告载体PGL3-basic，将pcDNA3.1-PGC-1αpcDNA3.0-HNF4α表达质粒与PGL3-hPCK-luc按不同组合共转染进人肝癌细胞株HepG2细胞或正常人肝细胞株LO2细胞,培养48 h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性【结果】通过酶切鉴定及测序证明扩增...

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Published in	Zhongshan da xue xue bao. Zhongshan daxue xuebao yixue kexue ban = Journal of Sun Yat-sen University. Yi xue ke xue ban Vol. 32
Format	Journal Article
Language	Chinese
Published	Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 01.01.2011
Subjects	基因表达调控磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶糖异生过氧化物酶体增殖物辅助激活因子1α
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ISSN	1672-3554

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Summary:	【目的】构建人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因启动子荧光素酶报告质粒PGL3-hPCK-luc，并探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ辅助激活因子1α(PGC-1α)在转录因子肝细胞核因子4α(HNF4α)介导下对人PEPCK基因启动子活性的影响【方法】从人全血基因组DNA中克隆PEPCK启动子基因片段，并重组进荧光素酶报告载体PGL3-basic，将pcDNA3.1-PGC-1αpcDNA3.0-HNF4α表达质粒与PGL3-hPCK-luc按不同组合共转染进人肝癌细胞株HepG2细胞或正常人肝细胞株LO2细胞,培养48 h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性【结果】通过酶切鉴定及测序证明扩增的人PEPCK启动子片段成功插入载体质粒中转染后人PEPCK启动子基因荧光素酶活性较空白对照组增加60倍(P < 0.05)；共转染质粒进HepG2细胞或LO2细胞后，HNF4α均可以增强人PEPCK启动子基因荧光素酶活性，在HepG2细胞，荧光素酶活性是对照组的2.69倍(P < 0.05)，而在LO2细胞中，荧光素酶活性是对照组的3.64倍(P < 0.05)；PGC-1α可以明显增强HNF4α对人PEPCK启动子的激活作用，在HepG2细胞，荧光素酶活性是PGL3-HPCK-luc+HNF4α组的2.01倍(P < 0.05)，而在LO2细胞中,荧光素酶活性是PGL3-HPCK-luc+HNF4α组的2.82倍(P < 0.05)而与单一转染组相比，共转染pcDNA3.1-PGC-1α与pcDNA3.0-HNF4α显著增加了PEPCK的mRNA和蛋白表达水平(P < 0.05)【结论】人PEPCK启动子基因报告质粒成功构建，且转录因子HNF4α可以激活人PEPCK启动子活性，辅助激活因子PGC-1α可以进一步加强HNF4α的作用
ISSN:	1672-3554