稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株的构建及其受体拮抗剂的初筛 - 林卡娜; 王欣欣; 黄雪琴; 蔡蓓蕾; 方三华; 卢韵碧; 张纬萍; 魏尔清 (浙江大学学报（医学版）, 2011)
Q256%Q421; 目的:构建稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株,并初筛具有hCysLT2受体拮抗活性化合物.方法:采用Lipofectamine 2000将质粒pcDNA3.1(+)-hCysLT2转染至HEK293细胞中,用96孔板有限稀释法挑选阳性单克隆细胞株,以RT-PCR和免疫荧光法检测hCysLT2基因的表达.稳定表达hCysLT2受体的HEK293细胞株,以激动剂LTD4诱导细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)增高为指标,初步筛选有拮抗作用的化合物.结果:转染后的HEK293细胞中挑选12个单克隆细胞株,11株高表达hCysLT2受体.阳性刺激物ATP为50 μmol/L及LTD4 100 nmol/L能升高[Ca2+]i.AP-2100984抑制LTD4诱导的hCysLT2-HEK293细胞[Ca2+]i升高,CysLT1受体选择性拮抗剂无抑制作用.新合成化合物DXW2、DXW3、DXW4、DXW5、DXW9、DXW25、DXW26、DXW29、DXW35在1 μmol/L能显著抑制LTD4引起的[Ca2+]i升高,其中DXW4和DXW5的IC50分别为0.25 μmoL/L和7.5 μmol/L.结论:成功构建稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株,并可用于有拮抗活性化合物的筛选.