不结球白菜耐热相关基因BcNAC036的克隆、亚细胞定位及功能分析 - 刘路平; 刘高峰; 蒋程; 侯喜林 (南京农业大学学报, 2022)
S634.3; [目的]本文旨在研究不结球白菜基因BcNAC036的亚细胞定位及高温胁迫下的表达分析,并探索其功能及调控机制.[方法]以不结球白菜'苏州青'为试验材料,提取叶片总RNA并且反转录成cDNA,同源克隆BcNAC036的全长基因序列,运用在线软件工具对其进行生物信息学分析.采用同源重组的方法构建过表达载体pCAMBIA1302-BcNAC036-GFP,农杆菌介导法将构建的过表达载体注射入本氏烟草叶片背面,通过激光共聚焦显微镜观察其亚细胞表达部位.采用RT-qPCR技术检测高温处理下不结球白菜耐高温品种'苏州青'和热敏感品种'矮脚黄'以及转基因拟南芥体内BcNAC036基因的表达量.对转基因拟南芥进行高温处理并统计其成活率.[结果]同源克隆的方法获得BcNAC036基因,其开放阅读框(ORF)为840 bp,编码279个氨基酸,相对分子质量为32154.83,等电点是8.96.氨基酸序列比对以及同源进化树分析结果显示,BcNAC036蛋白与芜菁、甘蓝型油菜NAC036蛋白同源关系较近.亚细胞定位结果显示,BcNAC036的亚细胞定位表达在细胞核.RT-qPCR表明,BcNAC036在耐高温和热敏感品种中表达差异较大且表达量均呈明显下降趋势.转基因拟南芥与野生型相比,其成活率较低.[结论]BcNAC036蛋白在细胞核表达,BcNAC036基因与不结球白菜耐高温性呈负相关.