马链球菌兽疫亚种SclE蛋白原核表达及其免疫效力评价 - 徐宇萌; 郭政; 李亚娟; 邓静飞; 何颍欣; 黄云飞; 付强 (南方农业学报, 2023)
S852.4; [目的]探究马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi ssp.zooepidemicus,SEZ)表面蛋白SclE的免疫效力,为预防SEZ引起的链球菌病提供理论依据.[方法]采用PCR扩增SEZ的SclE基因,再将该片段克隆至原核表达pCold I载体上,然后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后以SDS-PAGE进行分析鉴定,获得的重组蛋白SclE(rSclE)(100 μg/mL,0.5 mL)以腹腔注射形式免疫BALB/c小鼠(n=10,一免、二免的周期均为14d).一免、二免14d后收集血清,通过ELISA和Western blotting检测抗体水平和特异性.二免后进行免疫保护试验,并对攻毒后小鼠的肝、脾、肺、肾进行细菌载量检测和病理组织学观察.[结果]SDS-PAGE检测到大小约为93 kD的蛋白表达,与SclE的理论分子量大小一致;Western blotting检测显示,表达所得重组蛋白能与SEZ阳性对照组(腹腔注射0.5 mL SEZ灭活疫苗)小鼠血清发生特异性结合,表明其具有良好的反应原性.ELISA检测显示,二免后小鼠血清中特异性抗体水平与一免后相比均有显著提升(P<0.05,下同),且可诱导小鼠产生高滴度的IgG,其中IgG1抗体水平(0.436±0.031)显著高于IgG2a(0.161±0.009),表明rSclE诱导的抗体亚型以IgG1为主;rSclE免疫小鼠可显著抑制SEZ在各脏器中的增殖能力,肝脏、脾脏出血及炎性细胞浸润的症状得到改善,肺脏和肾脏出血等病理损伤减轻;在小鼠免疫攻毒保护试验中保护70%小鼠免受致死剂量SEZ毒株的攻击.[结论]成功表达获得的rSclE能诱导小鼠产生SclE特异性抗体,且具有较好的保护效果,可作为一种SEZ潜在的疫苗候选抗原.