胰腺多肽纳米抗体的制备及结合活性分析

Q812; 胰腺多肽(pancreatic polypeptide,PP)是一种含36个氨基酸的胰腺激素,在评估胰腺功能和辅助诊断相关疾病中发挥重要作用.以PP为靶点,筛选特异性的PP纳米抗体,评估其与PP抗原是否具有结合活性.利用原核表达系统制备了高纯度的PP抗原,经免疫羊驼后构建了高库容和高丰度的胰腺多肽免疫的纳米抗体噬菌体文库,并通过噬菌体展示技术进行文库筛选,获得8株胰腺多肽纳米抗体.选取1株纳米抗体(PP-VHH)构建原核表达体系,经IPTG诱导表达、纯化与鉴定,通过间接ELISA和双抗夹心ELISA分别检测和评价抗原抗体的结合活性和血清中PP含量,结果显示,PP-VHH与PP具有结...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Published in中国生物化学与分子生物学报 Vol. 40; no. 9; pp. 1273 - 1281
Main Authors 任泓睿, 贾琼, 王家庆, 田婧婧, 李荣杰, 郝花花, 李建丽, 渠志灿, 范瑞文
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 山西农业大学动物医学学院羊驼生物工程实验室,山西晋中 030801%山西纳安生物科技股份有限公司,太原 030006 20.09.2024
Subjects
胰腺多肽
binding activity
原核表达
纳米抗体
pancreatic polypeptide(PP)
nanobody
prokaryotic expression
结合活性
Online AccessGet full text
ISSN1007-7626
DOI10.13865/j.cnki.cjbmb.2024.07.1111

Cover

More Information
Summary:Q812; 胰腺多肽(pancreatic polypeptide,PP)是一种含36个氨基酸的胰腺激素,在评估胰腺功能和辅助诊断相关疾病中发挥重要作用.以PP为靶点,筛选特异性的PP纳米抗体,评估其与PP抗原是否具有结合活性.利用原核表达系统制备了高纯度的PP抗原,经免疫羊驼后构建了高库容和高丰度的胰腺多肽免疫的纳米抗体噬菌体文库,并通过噬菌体展示技术进行文库筛选,获得8株胰腺多肽纳米抗体.选取1株纳米抗体(PP-VHH)构建原核表达体系,经IPTG诱导表达、纯化与鉴定,通过间接ELISA和双抗夹心ELISA分别检测和评价抗原抗体的结合活性和血清中PP含量,结果显示,PP-VHH与PP具有结合活性,且PP-VHH可用于检测鸡和人血清中的PP.建立的双抗夹心ELISA法拟合曲线R2为0.9868,可检测不同个体鸡血清中PP浓度为48-55 pg/mL.而人血清中PP浓度范围波动较大.综上所述,本研究筛选到的1株纳米抗体PP-VHH,可用于检测鸡和人血清中的PP含量,为评估胰腺功能异常或诊断相关疾病提供基础.
ISSN:1007-7626
DOI:10.13865/j.cnki.cjbmb.2024.07.1111