基于NLRP3/CASP1/GSDMD通路探讨益肾通络方抑制糖尿病肾脏疾病小鼠足细胞焦亡的作用机制 - 赵靓; 向世勰; 谢治深; 王潘; 石贤聪; 王佳俊; 段亚飞; 张振强; 陈洁; 徐江雁; 张效威 (北京中医药大学学报, 2023)
R285.5; 目的 观察益肾通络方(熟地黄、黄芪、山萸肉、丹参、大黄、鬼箭羽、血竭)对db/db小鼠足细胞及小鼠肾足细胞MPC-5 焦亡的影响,探讨其抑制糖尿病肾脏疾病足细胞焦亡改善足细胞损伤的可能作用机制.方法 ①体内实验.以db/db小鼠(模型组及各给药组)及同窝对照db/m小鼠(对照组)为研究对象.db/db小鼠按体质量随机分为 5 组,除模型组外,其余 4 组分别按照每日1.0、2.5、5.0 g/kg剂量给予益肾通络方及 10 mg/kg缬沙坦灌胃,模型组及对照组给予等量蒸馏水.治疗8 周后,透射电子显微镜观察小鼠肾脏组织中足细胞数量与形态变化情况;对肾脏组织进行TUNEL染色,同时利用免疫荧光技术标记足细胞标志蛋白Wilms瘤基因 1(WT-1);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平;利用实时荧光定量PCR、Western blotting检测小鼠肾脏组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(CASP1)、焦孔素D(GSDMD)mRNA及蛋白表达和激活情况.②体外实验.以糖基化终末期产物(AGEs)诱导的小鼠肾足细胞 MPC-5 为研究对象,利用 CCK-8 法及乳酸脱氢酶(LDH)释放检测技术,评价细胞成活率及细胞膜完整性;利用Q-PCR、Western blotting检测MPC-5细胞中NLRP3、CASP1、GSDMD的mRNA及蛋白表达和激活情况.结果 ①体内实验.与对照组相比,模型组小鼠肾脏足细胞足突出现融合,基底膜明显增厚,肾脏组织TUNEL染色阳性细胞比例增加,WT-1 阳性表达率下降,血清中IL-1β、IL-18 含量增加,NLRP3、CASP1、GSDMD、IL-1β及IL-18 mRNA表达上调,NLRP3 蛋白表达上调,CASP1、GSDMD被激活(均P＜0.05);与模型组相比,益肾通络方不同剂量干预后,肾脏组织的足细胞损伤情况缓解,肾脏组织TUNEL阳性细胞明显减少,血清中 IL-1β、IL-18 含量下降,NLRP3、CASP1、GSDMD mRNA 表达下调,NLRP3 蛋白表达下调,CASP1、GSDMD通路蛋白激活被抑制(均P＜0.05).②体外实验.与对照组相比,模型组MPC-5细胞活性下降,LDH释放增加,NLRP3、CASP1、GSDMD、IL-1β及IL